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本实验对异硫氰酸胍一步法、Trizol试剂法和RNA抽提试剂盒法三种不同的病毒RNA提取方法做了对比试验，用紫外光检测RNA纯度和电泳检测RNA的完整性的方法对三种提取方法作为评价指标，以找出适合禽传染性支气管炎病毒RNA提取方法。结果表明：三种RNA提取方法的对比实验表明三种方法中，异硫氰酸胍一步法提取的RNA样品纯度不高，且不完整；Trizol试剂法和RNA抽提试剂盒法提取的RNA样品纯度和完整性都较理想，两者提取效果差异不显著，考虑到成本的因素，本研究选用Trizol试剂法做为今后的RNA提取方法； 通过在IBV非结构基因3abc的保守区域设计一对引物，对引物的特异性进行检验；建立和优化了一步法RT-PCR，在此基础上组装成一步法RT-PCR检测试剂盒。引物的特异性实验表明，用该引物对IBV分离株和IBV标准株检测成阳性，而对IB DNA疫苗和鸡相关病原体检测呈阴性，阳性产物回收后测序表明，扩增出的阳性片段为IBV的3abc基因。 通过对8株IBV国内分离株和3株国内标准株以及IB DNA疫苗（S1、M和N三基因混合）和4株鸡常见病原体的检测来检验试剂盒的特异性。结果表明，试剂盒对IBV分离株和IBV标准株检测成阳性，而对IB DNA疫苗和鸡相关病原体检测呈阴性；用试剂盒对不同浓度的病毒RNA模板进行检测来检验试剂盒的灵敏度结果表明：试剂盒最低可以检测出浓度为10-3ng／μl的IB病毒RNA模板；通过在试剂盒组装后的6个月内定期用试剂盒对IBV毒株、IB DNA疫苗和鸡常见病原体的检测，来检验试剂盒的稳定性和重复性，结果表明：6个月后，试剂盒的稳定性未下降，具有较好的灵敏度和特异性。 用一步法RT-PCR试剂盒、两步法RT-PCR和ELISA方法对人工感染鸡进行对比检测。结果表明：试剂盒和两步法RT-PCR均能特异地检测出IBV，试剂盒比两步法RT-PCR节省了1.5小时的检测时间，并节约了成本，减少了试剂污染的可能。试剂盒和ELISA方法均能特异地检测出IBV，试剂盒比ELISA方法提前36小时检测出IBV。 试剂盒对IB DNA疫苗免疫鸡、人工IBV感染鸡和自然感染病例进行检测。结果表明，试剂盒对IB DNA疫苗免疫的检测全部呈阴性；试剂盒可以对人工IBV感染鸡