持续发光信号传导体系的构建及其分析应用研究

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发光信号传导体系具有选择性高、简便快速、设计灵活以及灵敏度高等优点,在分析检测研究方面颇受关注。持续发光信号具有重复性好和不易受样品基质荧光的干扰等优点,在复杂样品分析领域具有良好的应用前景。本论文旨在发展基于多种具有持续发光特性的辉光型化学发光和长余辉发光信号传导体系,并应用于食品和生物样品中痕量目标物的高灵敏度和高选择性检测,主要研究结果如下:构建了对溴苯酚增强型双酶介导持续化学发光信号传导体系,并将其应用于发展食品中超痕量黄曲霉毒素B1(AFB1)的分析方法。将蛋白G固定于96孔板上用于识别抗AFB1单克隆抗体的Fc片段,从而提高抗原抗体的免疫学反应效率并减少抗体用量。制备了AFB1和葡萄糖氧化酶(GOD)的偶联物(AFB1-GOD),并以此偶联物与目标物AFB1竞争识别固定在96孔板上的有限抗AFB1单克隆抗体。利用对溴苯酚作为化学发光增强剂,采用GOD和辣根过氧化物酶(HRP)双酶高效催化,使得信号传导体系中化学发光强度持续稳定且得到增强,提高了分析灵敏度,拓宽了检测线性范围。该方法具有良好的选择性,线性范围达5个数量级,检测限为5 pg L-1,对于AFB1(100 ng L-1)的测定精密度为1.9%(RSD,n=11)。该方法成功应用于谷物样品中AFB1的测定,加标回收率为94.0%-97.0%。该持续发光信号传导体系适用于食品中各种污染物或营养物质的高通量、超灵敏、高特异性检测。基于L-半胱氨酸介导金纳米粒子聚集和长余辉发光纳米粒子,建立了比率吸收和时间分辨荧光共振能量转移双信号传导体系。金纳米粒子的高摩尔消光系数和可调吸收特性以及L-半胱氨酸介导的金纳米粒子聚集使吸收峰发生显著的红移,为检测L-半胱氨酸提供了比率信号。L-半胱氨酸介导金纳米粒子聚集引起表面等离子共振吸收峰红移,与长余辉纳米粒子的余辉发射光谱发生重叠,产生共振能量转移,为胰岛素检测提供了平台。利用该双信号传导体系实现了L-半胱氨酸和胰岛素的高通量顺序检测。该体系对L-半胱氨酸的检测限为2.2 nmol L-1,在10 nmol L-1至5.5μmol L-1范围内具有良好的线性和精密度;对胰岛素的检测限为2.1 pmol L-1,在12 pmol L-1至3.4 nmol L-1范围内具有良好的线性和精密度。所研制的双信号纳米平台已成功应用于人血清中L-半胱氨酸和胰岛素的无基质干扰顺序测定。采用一步水热合成法制备了形貌规则、粒度均一、发光性能良好的鱼雷状绿色发光长余辉纳米粒子(Zn2GeO4:Mn2+,Pr3+)(ZGMP)。发现了该类材料能够被酸降解,具有酸刺激响应发光特性,并探讨了ZGMP的酸响应机理。利用ZGMP的持续发光特性和酸刺激响应性质,结合酶专一催化其底物、抗原抗体特异性识别、酸碱反应等原理,将刺激响应型ZGMP作为发光信号传导探针应用于血清中葡萄糖和谷物样品中AFB1等的高选择性测定。所制备的刺激响应型ZGMP分析性能良好,在食品安全和生物分析等领域中具有较好的应用前景。
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