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流感嗜血杆菌可引起人类多种传染性疾病,最常见和最严重的是脑膜炎,其次是肺炎。根据主要的毒力因子一荚膜的有无,可将其分为两大类有荚膜型和无荚膜型。前者有a、b、c、d、e、f六个荚膜型别,其中b型最为流行,主要感染对象为儿童,几乎所有由hi(Haemophilus influenzae Hi)引起的脑膜炎病例和大多数其它菌血性病例均是感染b型菌所致。Hib是全球性的公共卫生问题,其发病率高、死亡率高的特点,促使科学工作者不断研究如何用疫苗来预防Hib感染。自上世纪80年代Hib疫苗问世以来,目前全球已有九十多个国家使用这一疫苗。在儿童免疫规划中常规接种疫苗的国家和地区,Hib疾病发病率迅速下降甚至消失。近年来人们发现Hib对氨苄青霉素和其它一些抗生素的耐药率增高,通过疫苗预防Hib疾病变得比以往更要。第一部分是b型流感嗜血杆菌多糖制备工艺的研究。首先制备了b型流感嗜血杆菌CMCC58534株的种子批,并进行了检定,然后对其进行扩大培养与发酵,之后通过甲醛杀菌、沉淀复合糖、去除核酸、沉淀粗糖、苯酚抽提去除蛋白、超滤去除苯酚、沉淀精糖等步骤对其荚膜多糖进行纯化。通过几批发酵培养与纯化,对其生产工艺进行了探讨与优化,最后确定发酵、纯化条件,在此条件下进行了连续三批100L发酵中试,得到的精糖产量均高于80mmg/L,且精糖鉴别试验、化学检定、细菌内毒素检查均合格,核磁共振检测证明其结构正常。说明生产工艺稳定,能够得到合格的Hib多糖。第二部分是流感嗜血杆菌D蛋白基因工程可溶性表达。流感嗜血杆菌蛋白D (Protein D, PD)是高度保守的表面脂蛋白,相对分子质量约42000,存在于所有可分型Hi和不可分型Hi(NTHi),是一种具有甘油磷酸二酯酶活性的细菌毒力因子,能导致宿主上皮细胞释放磷酸胆碱,在Hi引起呼吸道感染过程中起重要作用。流感嗜血杆菌D蛋白作为疫苗载体已应用于十价的肺炎结合苗中,在国外上市,安全性和免疫性均较好。本研究将Hib基因组DNA中去除信号肽的hpd基因片段插入pET43.1a表达质粒,转化感受态大肠杆菌BL21(DE3), IPTG诱导表达。表达的重组蛋白,经过硫酸铵沉淀和DEAE sepharose Fast Flow阴离子交换层析纯化后,通过Western blot的方法证明得到了具有良好免疫反应原性的D蛋白。表达的蛋白以可溶性蛋白形式表达,表达量约占菌株总蛋白的44%。