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单核细胞增生性李斯特氏菌(Listeria monocytogenes)是一种重要的人兽共患食源性病原菌,在自然界广泛存在,且能够在食品加工环境中形成生物被膜。Lactobacillus产生的有机酸、过氧化氢、细菌素等代谢产物安全高效、不产生耐药性,是控制L.monocytogenes感染的良好选择。本课题研究了Lactobacillus培养上清液对浮游态和生物膜态L.monocytogenes的抑制作用。首先采用牛津杯双层平板扩散法得到Lactobacillus plantarum Y42的抑菌圈直径为21.64 mm,显著高于其它菌株。L.plantarum Y42的培养上清液冷冻干燥后,用蒸馏水配制成240 mg/mL至30 mg/mL连续2倍稀释的复溶液,采用微孔板刃天青显色法得到复溶液的最小抑菌质量浓度(Minimal inhibitory concentration,MIC)为60 mg/mL。1/2×MIC的L.plantarum Y42培养上清液不会抑制L.monocytogenes的生长,因此1/2×MIC、1/4×MIC、1/8×MIC、1/16×MIC和1/32×MIC的L.plantarum Y42培养上清液对L.monocytogenes生物膜的抑制作用,可以排除L.plantarum Y42培养上清液抑菌作用的干扰。微孔板结晶紫染色法定量得到L.monocytogenes为中等生物膜形成菌株。选用环丙沙星和左氧氟沙星测定浮游态和生物膜态L.monocytogenes的抗生素药敏性差异,结果发现,生物被膜态的L.monocytogenes对环丙沙星和左氧氟沙星的耐药性均是浮游态L.monocytogenes的128倍。低于最小抑菌浓度的L.plantarum Y42培养上清液分别与环丙沙星、左氧氟沙星共同作用于L.monocytogenes生物膜时,环丙沙星和左氧氟沙星的最小生物膜清除质量浓度(Minimum biofilm eradicate concentration,MBEC)均降低为其单独使用时的1/2-1/4。采用微孔板结晶紫染色法定量低于最小抑菌浓度的L.plantarum Y42培养上清液对L.monocytogenes的形成抑制及清除作用,结果显示,1/2×MIC、1/4×MIC、1/8×MIC、1/16×MIC和1/32×MIC的L.plantarum Y42培养上清液都能显著抑制L.monocytogenes生物膜的形成,并能显著清除预先制备的成熟L.monocytogenes生物膜。且L.plantarum Y42培养上清液的浓度为1/8×MIC时,对L.monocytogenes生物膜形成的抑制率达到最高为40.75%,同时对成熟生物膜的清除率达到最高为32.24%。通过光学显微镜和扫描电子显微镜定性观察低于最小抑菌浓度的L.plantarum Y42培养上清液对L.monocytogenes在盖玻片上形成生物膜的形态和生物量的影响。结果发现低于最小抑菌浓度的L.plantarum Y42培养上清液可有效减少L.monocytogenes在盖玻片上的黏附、聚集及细胞外聚合物的分泌,从而抑制生物膜的伸长加厚,甚至能使生物膜的三维结构坍塌,使膜内菌体从原生物膜中脱离,重新成为浮游菌体。通过Pearson相关系数分析L.plantarum Y42培养上清液对L.monocytogenes细胞表面性状的抑制与L.plantarum Y42培养上清液抑制L.monocytogenes生物膜形成之间的相关性。结果表明,L.plantarum Y42的培养上清液抑制L.monocytogenes生物膜的形成与L.monocytogenes自聚性、疏水性受到抑制无显著相关性,而是通过降低L.monocytogenes的运动性以及细胞外蛋白和细胞外多糖的分泌来干扰L.monocytogenes生物膜的形成。此外,低于最小抑菌浓度的L.plantarum Y42培养上清液还可抑制L.monocytogenes在HT-29细胞上的黏附。L.plantarum Y42培养上清液中经浓度为60%和80%的硫酸铵盐析得到的粗蛋白组分3和粗蛋白组分4对L.monocytogenes生物膜形成具有良好的抑制作用。总之,L.plantarum Y42培养上清液对浮游态和生物膜态L.monocytogenes具有良好的抑制作用。但L.plantarum Y42培养上清液抑制L.monocytogenes生物膜形成的根本机制还有待进一步的研究。