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甘油磷脂酸胆碱(L-α-glycerophosphocholine,简称GPC)在食品、制药等各大领域备受关注,市场需求大。蛋黄中富含的磷脂为GPC的制备提供了丰富的原料。然而高纯度GPC的生产技术目前还不够成熟。开发以易得的原料制备高附加值的GPC产品,并且适合规模化生产的工艺意义重大。本课题首先确定了高效液相色谱仪-蒸发光散射检测器(HPLC-ELSD)快速检测GPC的方法,在GPC的制备工艺中对产品进行监测。以蛋黄粉为原料,经过萃取磷脂酰胆碱(Phosphatidyl choline,PC)、水解催化、分离纯化等步骤得到高纯甘油磷脂酰胆碱,用自然沉降代替溶剂萃取进行初步分离,优化了工艺参数。首先根据GPC的分子结构和性质选择合适的色谱柱、流动相体系、检测器以及仪器参数,建立HPLC-ELSD快速准确检测GPC的方法。具体条件为:色谱柱AlltimaSilica(4.6 mm×250mm,5 pm);流动相为甲醇:水:乙酸:三乙胺(90:10:0.18:0.02,v:v:v:v),流速为1.5mL/min等度洗脱;色谱柱温度45 ℃;增益5;载气压力40 Psi;喷雾器为加热模式,动力水平50%;漂移管温度65℃。GPC的保留时间为6.6 min左右,远远低于前人的检测方法。然后,对最优检测条件进行方法学验证,结果表明,GPC的检出限为0.05 mg/mL,定量限为0.08 mg/mL,并且重复性、稳定性、精密度良好。以蛋黄粉为原料,通过丙酮洗去蛋黄粉中的油脂,得到丙酮不溶物,再利用乙醇进一步萃取丙酮不溶物中的PC。单因素和正交试验结果表明:丙酮萃取阶段的萃取温度20℃ 料液比1:7,萃取时间70 min。在此最佳条件下,PC萃取率为96.9%。乙醇萃取阶段,最佳条件为萃取温度40 ℃,萃取时间50 min,料液比1:8,在最优条件下PC萃取率为98.8%。再以上一步的萃取产物PC为原料,通过催化水解法制备甘油磷脂酰胆碱。对比了甲醇钠、乙醇钠、磷脂酶作为催化剂的催化水解效果。结果发现,在水相体系中进行酶催化反应,GPC的最高产率只有76.3%,并且反应时间过长,结果重现性较差。甲醇钠为催化剂时,反应2 h后,GPC产率就能达到88.1%;乙醇钠为催化剂时,反应2h后GPC产率仅有60%左右。考察甲醇、乙醇作为溶剂的催化效果,结果表明甲醇作溶剂的催化效果优于乙醇。综上所述,甲醇-甲醇钠体系,反应时间短,且GPC产率高,初步选择此体系进行后续实验。通过单因素和响应面优化试验,建立模型方程,R-Squared=0.9956,Adj R-Squared=0.9906,表明方程拟合度较高。由F检验可以得到各因子贡献率:反应温度>料液比>甲醇钠添加量>反应时间。最佳反应条件为:时间97.82min,温度36.67 ℃,催化剂用量4.99%,料液比1:7.58,在此条件下得到GPC产率平均值为97.82%,与预测值99.31%吻合度较高,模型方程可以作为理论值的预测。最后对GPC产液进行纯化和脱色。反应液脱溶后,室温自然沉降1 h后分为清晰的两层,弃去上层。通过硅胶色谱柱(3cm×30cm),去除部分脂肪酸和其他磷脂成分,最优条件为:湿法装柱,洗脱剂为甲醇:水=9:1(v:v)的混合溶剂,流速2 ml/min,样品与硅胶质量比为1:20。利用质量比为1:2的阳离子、阴离子交换树脂对硅胶柱洗脱液进行除盐并调节产品PH,001×7树脂与洗脱液比例为1:25(m:v),70min即可完全脱除Na+离子,溶液PH为6.10。进一步通过活性炭脱色后得到纯度为99.8%的GPC,回收率为86.5%。通过HPLC-ELSD、IR、1H-NMR、13C-NMR和MS等对最终GPC产品进行检测,结果与标准品吻合。