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手性3-环己烯-1-甲酸是一种重要的化工原料和医药中间体,广泛应用于手性药物、手性添加剂、手性助剂等领域。本课题旨在研究利用酶法催化制备手性3-环己烯-1-甲酸,包括以下两条路线:1.微生物酯酶拆分外消旋3-环己烯-1-甲酸甲酯;2.酶法不对称合成4-环己烯-1-甲酸-2-甲酸甲酯。论文首先利用3-环己烯-1-甲酸甲酯为唯一碳源从土样和实验室保存菌粉中筛选到一株立体选择性较高的R-构型水解酶产生菌,通过形态学观察和16S rDNA序列分析,初步确定为不动杆菌属,并命名为Acinetobacter sp 192。论文对Acinetobacter sp 192整细胞催化立体选择性水解拆分外消旋3-环己烯-1-甲酸甲酯的反应条件进行研究,确定最优反应条件为:0.2 M pH7.5的磷酸钾缓冲液体系,Acinetobacter sp 192整细胞添加量10 g/L,底物浓度4%(v/v),反应温度40oC,以1 M NaOH溶液为中和剂。最优反应条件下恒pH反应5 h,底物的e.e._s值>99.9%,产物的e.e._p值为75%,收率为40.7%,对映选择率E为50.33。论文以顺-1,2,3,6-四氢邻苯二甲酸酐为底物出发,醇解制得4-环己烯-1,2-二甲酸二甲酯。再通过酶法不对称水解4-环己烯-1,2-二甲酸二甲酯或酶法不对称醇解顺-1,2,3,6-四氢邻苯二甲酸酐得到手性的4-环己烯-1-甲酸-2-甲酸甲酯,实验得出以Novozyme 435不对称水解4-环己烯-1,2-二甲酸二甲酯合成手性4-环己烯-1-甲酸-2-甲酸甲酯效果最优,其酶催化反应条件如下:底物浓度10%(v/v)、1%(w/v)Novozyme 435、40℃、pH 8.5条件下催化反应27 h得到e.e.值为90%的(1S,2R)-4-环己烯-1-甲酸-2-甲酸甲酯。萃取提纯后,再将(1S,2R)-4-环己烯-1-甲酸-2-甲酸甲酯脱羧得到(R)-3-环己烯-1-甲酸甲酯,并水解得到(R)-3-环己烯-1-甲酸,最终产物e.e.值在99.5%以上,产物利用气质联用分析进行结构鉴定。