论文部分内容阅读
目的:乳腺癌是女性最常见恶性肿瘤之一,且发病率逐年攀升,严重威胁广大女性的生命健康,目前乳腺癌的发病机制还尚不清楚,尚无有效的措施预防,目前对于乳腺癌的治疗主要有:手术、化疗、放疗、靶向治疗以及内分泌等治疗。但是乳腺癌仍然是女性死亡率最高的肿瘤之一,寻找新的有效的治疗方法仍然是乳腺癌治疗研究的热点。近期国外研究者们发现了一种对乳腺癌细胞系MCF-7和前列腺癌细胞系DU145在体内外均具有诱导分化活性的含有108个氨基酸的多肽,命名为肿瘤转化因子(TDF)。它是一种由垂体产生的蛋白,其功能尚不明确。他们通过亲和提纯法(AP)和色谱仪和液体层析串联质谱仪(LC-MS/MS)对潜在的TDF受体(TDF-R)的分离和鉴别,确定了四种高度可信的蛋白质:GRP78、HSP8、HSP1、 HSPA9。因HSP8、HSP1、HSPA9分子量均为70KD无法在SDS-PAGE上分离开来,故统称为HSP70家族。所以目前为止,只有GRP78和HSP70最有可能是TDF-R。本文通过研究TDF受体在不同组织和细胞中表达情况及其功能片段TDF-P1对体外MCF-7细胞的细胞生物学效应的影响,探讨TDF可能的诱导分化机制,为探索乳腺癌特异性的诊断和治疗提供实验依据。方法:1、应用免疫组织化学法检测不同组织中TDF受体热休克蛋白70(heat shock proteins70,HSP70)和葡萄糖调节蛋白78(glucose regulated protein78kD,GRP78)的表达;Western Blotting检测不同细胞株中TDF受体的表达差异性;2、应用MTT比色法检测不同浓度和不同时间作用时间TDF-P1对乳腺癌细胞株MCF-7的增殖及活力的影响;流式细胞仪检测]TDF-P1作用后对乳腺癌细胞株MCF-7细胞周期的影响;Transwell小室检测TDF-P1作用后MCF-7细胞的迁移和侵袭能力。结果:1、GRP78蛋白在乳腺癌组织中表达稍高于其他癌组织,而正常乳腺组织中GRP78表达明显高于其他正常组织;而HSP70蛋白在癌组织中表达远高于正常组织,其余各组间表达无明显差异。MCF-7和MDA-MB-231两株细胞中GRP78蛋白表达量较其他组高,且以MCF-7细胞最为明显:而HSP70在各细胞株之间表达无明显差异。2、浓度分别为10ng/ml、50ng/ml、1000ng/ml的TDF-P1作用24h、48h、72h、96h后MCF-7细胞的增殖受到明显抑制,且抑制率呈浓度依赖性;浓度为1000ng/ml的TDF-P1作用后MCF-7细胞间粘附力增强;且细胞周期发生G0/G1期阻滞(77.2±2.63)%而使其无法向S期过渡,与正常对照组(47.56±1.23)%相比差异具有统计学意义(P<0.05);浓度为1000ng/ml的TDF-P1作用后迁移数为(112±9)个较对照组(423±28)个减少(P<0.01),侵袭细胞数为(20±5)个较对照组(126±11)减少(P<0.01)。结论:1、GRP78和HSP70蛋白在癌组织中表达高于正常组织。GRP78蛋白在乳腺癌组织中表达稍高于其他癌组织,而正常乳腺组织中表达量明显高于其他的正常组织2、TDF能诱导细胞呈集落样生长且对乳腺癌细胞MCF-7的增殖、迁移和侵袭能力有明显抑制作用,能使细胞周期停滞在Go/G1期。