论文部分内容阅读
人血清白蛋白(Human Serum Albumin,简称HSA)在人血浆中含量极其丰富,主要起维持血液的正常渗透压和运送亲水分子的作用。因此,人血清白蛋白的测定成为生物化学和临床检验中的重要内容。光谱法具有快速、简便、准确、仪器设备相对简单等优点。本论文分别采用分光光度法、二级散射法、反二级散射法和荧光光度法等四类光谱法对人血清白蛋白进行测定研究,同时进一步研究了罗丹明B和荧光黄的荧光光谱,具体内容如下: 1 在pH=3.5的Clark-Lubs缓冲溶液中,钙黄绿素与人血清白蛋白形成复合物,导致钙黄绿素吸光度降低。据此,建立了测定人血清白蛋白的分光光度法。该方法线性范围为1.14-17.1mg/L,最小检测限为0.94mg/L,平均加标回收率为101%,相对标准偏差RSD为4.75%(n=6)。 2 在pH=3.5的Clark-Lubs缓冲溶液中,人血清白蛋白与钙黄绿素结合而使钙黄绿素的二级散射和反二级散射强度增加。据此,建立了测定人血清白蛋白的二级散射和反二级散射法。该方法线性范围为0.11-1.37mg/L,最小检测限分别为0.061mg/L和0.057mg/L,平均加标回收率分别为96.7%和108%,相对标准偏差RSD分别为2.0%和1.9%(n=6)。 3 在pH=3.5的Clark-Lubs缓冲溶液中,人血清白蛋白与荧光黄结合而使荧光黄的二级散射和反二级散射强度增加。据此,建立了测定人血清白蛋白的二级散射和反二级散射法。该方法线性范围为0.057-0.68mg/L,最小检测限分别为0.033mg/L和0.054mg/L,平均加标回收率分别为98.8%和103%,相对标准偏差RSD分别为3.16%和4.29%(n=6)。 4 在pH=7.8的Clark-Lubs缓冲溶液中,钙黄绿素在阳离子表面活性剂CTMAB的作用下自聚成二聚体,体系荧光强度降低。当向体系中加入人血清白蛋白时,二聚体解聚,荧光强度增强。据此,建立了测定人血清白蛋白的荧光法。该方法线性范围为0.29-39.8mg/L,相关系数0.997,最小检测限为0.13mg/L,平均加标回收率为96.7%(n=3)。 5 考察了罗丹明B浓度、溶剂的极性、pH值的大小、表面活性剂的增敏等对罗丹明B的荧光光谱影响,并且初步探讨了其机理。