采用竞争法,即待测样品中的氯霉素与标记有辣根过氧化物酶的氯霉素竞争结合固相兔抗氯霉素抗体这一基本原理,利用鲁米诺体系作为化学发光底物,高灵敏地测定动物性食品中的氯霉素残留量。 将动物性食品预处理后加入包被有兔抗氯霉素抗体的白色发光板微孔中,氯霉素酶标记物和样品中的氯霉素竞争与固相抗体结合。反应结束后加入化学发光底物并检测发光计数,通过标准曲线求得样品浓度。 在化学发光免疫分析技术中,化学发光底物的制备是关键技术之一。制备的发光底物具有发光持续稳定、信噪比高、本底低、发光峰值适中的特点。在与进口化学发光底物进行的平行比较实验中发现两者各有所长,性能相当。 固相抗体包被浓度为3μg/ml,酶标记物工作液稀释度为1:10000,每孔加待测样品或标准品100μl和酶标记物工作液50μl,在37℃下反应1h,洗涤后每孔加发光底物180μl,3mins后在发光检测仪下检测发光计数。 该方法学灵敏度为0.046ng/ml,批内变异系数小于8%,批间变异系数小于20%。方法学回收率为87.4～101%,稀释实验相关方程为y=4.015x-0.120,相关系数为0.999。标准曲线的线性范围为0.05～10ng/ml。该方法与德国R-Biopharm的氯霉素酶联免疫分析方法的方法学比较实验中,相关方程为y=0.996x+0.144,相关系数为0.987。该方法克服了食品安全检测时动物性食品中的杂质影响发光持续性的问题,使得化学发光免疫分析技术得以在食品安全分析领域应用。使用该方法可以在短时间内出结果,具有快速、简便、高灵敏度等的特点。