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树突状细胞(dendritic cells,DCs)是一类专职的抗原递呈细胞,在天然免疫和获得性免疫应答中起重要作用。Clec8A是DC表面C型凝集素受体的一种,Clec8A表达于成熟或未成熟的树突状细胞表面起到识别和捕捉抗原的作用,靶向Clec8A受体的抗原可以促进DC成熟,刺激T淋巴细胞增殖,促使机体产生病原特异性的抗体。XCR1是C型趋化因子相应受体,利用DC表面受体的抗体或配体靶向抗原于DCs可增强抗原递呈效率,增强机体针对该抗原的获得性免疫应答水平。因此,本研究旨在研制猪Clec8A与XCR1受体的单域抗体,研究抗体或配体介导的抗原靶向免疫方法,为抗原靶向性疫苗研究奠定基础。根据已构建的抗DC表面受体Clec8A、XCR1的骆驼单域抗体酵母文库,利用原核表达的Clec8A与XCR1胞外区序列筛选抗Clec8A和XCR1的单域抗体。通过磁珠分选和流式细胞术染色分析,筛选验证抗体文库中表达单域抗体的酵母细胞,免疫磁珠三轮筛选后流式分析Clec8A阳性酵母细胞比例从2.19%上升到30.82%,XCR1阳性酵母细胞比例从0.49%上升到17.19%。从第三轮酵母细胞中挑取40个单克隆诱导培养,流式细胞术染色分析以及测序鉴定最终得到1株酵母细胞能表达抗Clec8A受体的单域抗体,测序鉴定得到该单域抗体的基因序列,通过本研究,在本实验室建立了免疫磁珠和流式筛选单域抗体文库的方法体系,为后续研究奠定了基础。本研究中将猪XCL1与A型FMDV多表位基因融合表达,以探讨其增强免疫的效果。首先设计包含三株A型口蹄疫病毒主要中和表位的抗原A10,将XCL1与A10基因串联表达,得到XA10蛋白,另外,突变XCL1中的两个半胱氨酸与A10串联表达,得到DXA10蛋白。原核表达的三种重组蛋白乳化成6种疫苗进行猪体免疫实验,攻毒以后单独XA10免疫组保护率80%(4/5),A10、DXA10添加或不添加CpG佐剂,保护率均为100%(5/5)。试验数据分析得出结论:猪XCL1趋化因子融合表达产物能增强机体细胞免疫应答。