奶牛乳房炎作为一种困扰全世界畜牧产业的一种疾病,每年给全世界畜牧业带来了难以估量的经济损失。无乳链球菌、停乳链球菌、乳房链球菌,三者同为链球菌属,其形态学、生物学特性相似,基因组成相近,都是能够造成奶牛乳腺感染的病原微生物。近些年流行病学调查表明:吉林省地区奶牛乳房炎发病率较高耐药性严重,且缺乏全面系统科学的调查研究。常规的细菌分离鉴定方法耗时耗力,周期长,不利于病情的快速诊断。此外,我国兽用抗生素使用泛滥,临床用药不合理不规范,导致细菌耐药问题十分严重。因此,建立一种高效快速的检测方法来开展全省范围内的奶牛乳房炎病例的鉴别诊断,并进行系统科学的耐药性分析对吉林省地区奶牛乳房炎的防治具有重要的意义。本研究以牛源乳腺致病性链球菌为研究对象,建立了一种能够同时快速检测无乳链球菌、乳房链球菌以及停乳链球菌的三重实时荧光定量PCR方法,应用该方法与生化鉴定法、16S r RNA PCR法对吉林省9个地区18个养殖场720份奶牛乳房炎病例奶样中链球菌进行分离鉴定;将分离鉴定出的三种链球菌菌株进行多位点序列（MLST）分型,并建立不同ST型的小鼠乳房炎病理模型。最后进行耐药基因的筛选和药敏试验,来对吉林省地区乳腺致病性链球菌进行一次系统全面的调查研究。结果显示:本研究所建立的三重实时荧光定量PCR方法灵敏性特异性均较好,稳定性较强,能够应用于实验室的快速诊断。吉林地区乳房炎奶样中共检出阳性奶样59份并成功从中分离到49株链球菌菌株,其中无乳链球菌25株、乳房链球菌7株、停乳链球菌17株。MLST分型结果显示:49株菌株共产生10种ST型,构建系统发育树表明:吉林地区乳腺致病性链球菌与全球其他地区链球菌亲缘性较远。10种ST型菌株的小鼠乳房炎病理组织学结果显示:不同ST型菌株均对小鼠乳腺组织造成感染,有明显的临床症状。病理组织学观察结果显示:乳腺泡上皮细胞出现溶解、脱落、坏死。不同链球菌株间细菌致病力差异较大。细菌耐药性研究结果表明:49株菌株中,共检测出抗生素靶点保护、抗生素靶点改变、抗生素灭活、抗生素外流耐药机制下5类抗生素的12种耐药基因型。PCR扩增试验和MIC试验结果表明:吉林地区链球菌多数为多重耐药菌,细菌耐药情况严重,青霉素依旧是治疗首选。综上所述:本研究在病原微生物分子生物学诊断技术上进行不断创新,成功建立了无乳链球菌、停乳链球菌、乳房链球菌多重荧光定量PCR检测方法,并对吉林地区乳腺致病性链球菌进行一次全面的筛查,通过MLST分型,病理模型构建以及耐药性分析,来为吉林地区乳腺致病性链球菌的诊断与溯源、耐药基因分布特征的研究以及奶牛养殖环节的用药提供科学的指导和技术支撑。