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鱼类及两栖类动物的视网膜睫状缘区(CMZ)存在视网膜干细胞，在视网膜损伤时，视网膜内有增殖潜能的细胞可快速增殖、分化以修复更新受损细胞。近年来，随着神经干细胞研究的不断深入，国外部分学者开始尝试哺乳动物视网膜干细胞的分离探索工作。研究资料显示，这些在进化上较高级的动物也存在着一个与鱼类及两栖类的CMZ区(睫状缘区)相似的区域，国内在视网膜干细胞的研究方面尚未见文献报道。目的：研究视网膜干细胞的分离、体外培养方法与增殖、分化规律，以期为视网膜疾病的研究提供基础性资料。方法：(1)应用细胞培养技术，在不同有丝分裂原(bFGF、EGF、胰岛素)作用下，比较胎龄17天昆明小鼠眼的睫状体部(CMZ)、视网膜色素部(RPE)、视网膜神经部(NR)以及虹膜部体外培养细胞的特点，确定视网膜干细胞的存在部位；(2)通过免疫细胞化学及免疫荧光方法研究视网膜干细胞的增殖及分化特性；(3)体外应用VEGF定向诱导视网膜干细胞向感光细胞分化。结果：(1)来自CMZ区的培养细胞，在特定外源性有丝分裂原作用下，可形成悬浮生长的细胞团，经多次传代，细胞增殖能力未见衰减。BrdU标记结果显示增殖的大部分细胞为BrdU阳性细胞，表明悬浮细胞团的形成主要是由分裂增殖的细胞组成。免疫荧光染色显示，培养细胞可表达神经干细胞的特异性抗原Nestin及胚胎发育早期视网膜内原始细胞的特异性抗原Chx-10。NR、RPE及虹膜部的分离细胞没有显示干细胞特性。(2)三种外源性有丝分裂原bFGF、EGF及胰岛素作用比较显示：bFGF、EGF可使来自CMZ的培养细胞以悬浮细胞团的生长方式体外维持8代，细胞依然保持较强的未分化特性，增殖能力可维持在较稳定的水平，未见减弱；胰岛素的刺激作用较弱，来自CMZ区的体外培养细胞仅可维持5代，细胞增殖能力弱，每低倍视野下悬浮细胞团数量明显少于bFGF、EGF作用组。(3)来自CMZ区的视网膜干细胞经5%胎牛血清诱导可自发向成熟细胞分化，可分别表达神经元与神经胶质细胞的特异性抗原NSE、GFAP。经免疫荧光检测显示分化细胞分别表达感光细胞、双极细胞以及节细胞的特异性抗原Opsin、PKC及β-Tubulin。(4)VEGF与5%的胎牛血清共同作用可定向诱导视网膜干细胞向感光细胞分化，感光细胞的诱导生成数量是单用血清诱导数量的2.05倍。<WP=7>结论：(1)小鼠视网膜干细胞存在于睫状体部位，在外源性有丝分裂原作用下体外培养可显示干细胞的未分化特性及增殖、自我更新功能；(2)在5%胎牛血清诱导作用下，来自CMZ区视网膜干细胞具有多向分化能力，可分化为感光细胞、双极细胞以及节细胞等视网膜神经细胞；(3)VEGF可作为一种有效的诱导因子定向诱导视网膜干细胞向感光细胞分化。