长链非编码RNA H19在宫颈癌细胞中的生物学功能研究

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目的:目前长链非编码RNA H19对于宫颈癌Hela细胞生物学功能的作用及其作用机制尚缺乏相关研究。本文主要探讨了Lnc RNA H19在宫颈癌Hela细胞中的生物学功能研究。方法:本研究选择在3种宫颈癌细胞株(He La,C33A,Ca SKi)和正常上皮细胞株(H8)中来检测Lnc RNA H19的表达。构建含H19基因的重组真核表达载体p CDNA3.1-GFP-H19,经双酶切及基因测序等鉴定构建成功,并合成si RNA的Lnc RNA H19干扰序列,同时设置空白对照组、p CDNA3.1-GFP组及si-NC组。各组细胞转染48h后采用RT-q PCR法检测Lnc RNA H19 m RNA相对表达水平;采用CCK-8法检测在转染后24h、48h、72h及96h细胞的增殖率;采用流式细胞仪分别检测各组24h和48h细胞凋亡率;采用细胞划痕实验检测各组细胞转染后的迁移数,评估细胞迁移能力;采用Transwell细胞体外侵袭实验检测各组细胞转染后的侵袭能力;采用Western blotting的方法检测Lnc RNA H19对EMT上皮标志物E-cadherin,间质标记物Vimentin及其MMPs家族中的MMP-9的蛋白表达。结果:3种宫颈癌细胞株(He La,C33A,Ca SKi)中Lnc RNA H19的表达明显高于正常上皮细胞株(H8)中Lnc RNA H19的表达。首先,过表达Lnc RNA H19可以显著促进Hela细胞体外增殖和抑制其凋亡,沉默Lnc RNA H19可以显著抑制Hela细胞体外增殖和促进其凋亡。其次,过表达Lnc RNA H19可以显著促进Hela细胞体外迁移、侵袭,沉默Lnc RNA H19可以抑制Hela细胞体外迁移、侵袭,该效应直接与EMT上皮标志物E-cadherin,间质标记物Vimentin及其MMPs家族中的MMP-9的蛋白表达相关。结论:上调Lnc RNA H19可以显著促进宫颈癌细胞增殖和抑制宫颈癌细胞凋亡,下调Lnc RNA H19表达则反之;上调Lnc RNA H19促进宫颈癌细胞迁移、侵袭,下调Lnc RNA H19表达则反之,同时可以引起EMT上皮标志物E-cadherin,间质标记物Vimentin及其MMPs家族中的MMP-9的蛋白表达发生改变。Lnc RNA H19在宫颈癌的发生、发展及预后中充当了重要角色,有可能作为一个发现及判断其预后的潜在生物标记物。
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