论文部分内容阅读
无限制的快速增殖是恶性肿瘤的主要特征,也是恶性肿瘤侵润、转移的基础。在人类肿瘤中已经发现和鉴定出许多种肿瘤抑制物,如Rb蛋白、P53蛋白等。近几年的研究发现,细胞命运决定因子Dachshundl(DACH1)细胞命运决定因子DACH1作为细胞/肿瘤内源性生长抑制物,能够抑制肿瘤的增殖。DACH1是黑腹果蝇Dachshund(Dac)基因在脊椎动物中的类似物。Dac基因是一种对细胞命运起决定作用的螺旋—转角—螺旋性核蛋白,它在果蝇属的眼睛以及肢体发育中起主要作用。DACH1作为一种内源性生长抑制物可在哺乳动物的正常组织中表达,作为内源性生长抑制物,与激活或转录的多种复合物有关；它并通过抑制对细胞迁移、粘附和生长起决定作用的基因的表达,从而抑制细胞的增殖。已有研究表明,在乳腺癌、卵巢癌中,DACH1在调节乳腺癌、卵巢癌肿瘤的增殖、侵润和转移中起重要作用，其中在分化较差的低分化肿瘤中DACH1其表达丧失,而在侵袭性肿瘤中,DACH1的表达较正常组织以及非侵袭性肿瘤均降低。DACH1在口腔癌中的表达及其作用尚未见报道,基于此我们设计实验,研究DACH1基因在口腔癌中的表达及作用。目的：检测细胞命运决定因子DACH1蛋白在口腔鳞癌和腺样囊性癌组织中的表达,并分析其与临床、病理特征及患者预后之间的关系。另外通过检测体外培养的鳞癌细胞系Tca8113，人腺样囊性癌细胞中DACH1的RNA表达水平,探讨DACH1在口腔鳞癌和腺样囊性癌发生发展中的作用,以期为口腔鳞癌和腺样囊性癌的诊断、治疗及预后判断提供新的依据。材料与方法：1.选取山东大学齐鲁医院2009年5月～2012年5月间收治的经病理检查证实的口腔鳞癌患者80例,腺样囊性癌18例,患者年龄在45-74岁之间,平均年龄为56.3岁。按照病理科诊断其中高分化鳞癌43例,中分化鳞癌27例,低分化鳞癌10例；通过DACH1蛋白在上述不同病理组织中阳性率的比较,及其表达与各临床病理指标之间关系的比较采用x2检验,DACH1蛋白在组织中表达之间的相关性分析采用Spearman秩检验相关分析。2.体外培养TCA8113舌鳞癌细胞系,人腺样囊性癌细胞,稳定传代后并用QIAGEN试剂盒提取总RNA,将总RNA逆转录为cDNA,然后用DACH1引物进行(Real-time fluorescence quantitative PCR, RFQ-PCR)实验,以β-act in作为内参通过相对定量法检测其DACH1转录mRNA的水平,从细胞分子层面检验DACH1的表达。结果：1.免疫组织化学结果显示,免疫组织化学结果示DACH1蛋白在高分化鳞癌、中分化鳞癌、低分化鳞癌中表达的阳性率依次减低；DACH1蛋白在腺样囊性癌组织中的表达较鳞癌高。2.RT-PCR显示体外培养的TCA8113舌鳞癌细胞系,人腺样囊性癌细胞的DACH1的mRNA表达水平与参考基因接近,之间没有差异(p>0.05),且两种细胞之间也未见明显差异(p>0.05)结论：DACH1蛋白在口腔鳞癌中的表达整体阳性率较低,鳞癌的分化程度越低,DACH1的表达水平越低；其在腺样囊性癌组织中的表达高于口腔鳞癌中的表达,与腺样囊性癌细胞增殖性比鳞癌差有关。DACH1的表达与肿瘤细胞的增殖相关。