轮状病毒(Rotavirus,RV)和产肠毒素大肠埃希氏菌(enterotoxigenic Escherichia coli, ETEC)是引起幼畜腹泻的主要病原。腹泻流行时可造成畜牧业的重大经济损失。目前疫苗预防仍然是控制此病的最佳选择,但常规疫苗存在死疫苗用量大且效果不好,活疫苗容易造成扩散和环境污染等缺点。转基因植物疫苗的研制,可以改变传统的疫苗接种方式和接种手段,而且可大大降低疫苗的生产成本,具有广阔的应用前景。而轮状病毒VP4和大肠杆菌ST、K88分别是这两种病原的主要保护性抗原或主要致病因子。因此选择轮状病毒VP4蛋白与大肠杆菌热稳定肠毒素ST及大肠杆菌菌毛抗原K88与热稳定肠毒素ST融合蛋白作为合适的抗原,研制抗腹泻的转基因植物口服疫苗具有重大的理论意义和实践意义。 本研究首先将植物表达载体pBLGC改造成了本实验要用的表达载体pBin438,为了便于基因操作,分别将K88-ST及VP4-ST的编码基因进行了适当的修饰和改造,将改造后的基因序列插入到植物表达载体pBin438中,成功的构建了重组表达质粒pBin-VP4-ST及pBin-K88-ST。将pBin-VP4-ST、pBin-K88-ST转入农杆菌EHA105,构建了农杆菌工程菌。利用农杆菌介导的叶盘法转化烟草,通过抗性筛选,获得两种转基因烟草植株,进一步通过PCR、Southern Blot检测,证实两个目的基因已经分别整合进入烟草的基因组中,然后经Western blot鉴定,证明由目的基因VP4-ST及K88-ST所编码的特异性蛋白在转基因烟草中分别获得了表达。