背景和目的微RNA(microRNA, miRNA)是一类非编码小RNA，长约22nt，其可通过与靶基因mRNA的3’-UTR碱基互补配对，从而抑制靶基因的表达。近年来，miRNA被报道参与肿瘤转移，但其调控肿瘤转移的分子机制有待进一步研究。上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition, EMT)，最显著的标志就是上皮标志物的丢失和间叶标志物表达上升，其可使上皮细胞转变成具有迁移能力的间质型细胞，已被报道不仅参与胚胎发育过程中的组织形成而且是增强肿瘤细胞侵袭和转移能力的主要机制。但是，其调控信号通路和具体机制仍未完全阐明。越来越多的研究表明，包括人类肿瘤增殖和肿瘤转移在内的人类疾病可能与某些特定的miRNA表达异常有关。这些研究结果均提示我们，一些miRNA可参与调控EMT。miR-33a，在代谢和代谢性疾病中经常出现异常表达，但它在EMT和转移中的作用至今研究甚少。本课题中我们主要研究miR-33a在人非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer, NSCLC）细胞EMT中的作用及其相关作用机制。方法（1）通过生物信息学法筛选发现miR-33a与EMT相关基因Twist1之间的潜在靶点关系。（2）根据miRNA设计原则设计合成miR-33a的mimics、inhibitor及其阴性对照。用脂质体将miR-33a的mimics和inhibitor分别转染NCI-H1299和SPC-A-1细胞，分别提高和降低细胞内相应miRNA的水平，并用荧光定量RT-PCR分析转染后miR-33a细胞中的表达变化以确认转染效果。（3）用荧光定量RT-PCR分析细胞转染相应miR-33a的mimics、inhibitor后Twist1在mRNA表达水平上的变化，同时用Western Blot分析Twist1蛋白表达变化。（4）用双荧光素酶分析系统进一步确认miR-31与Twist1之间的靶点调控关系。（5）应用荧光定量RT-PCR和Western Blot以及划痕实验和Transwell侵袭实验分别分析转染miR-33a mimics，miR-33a inhibitor和Twist1siRNA后NSCLC细胞EMT及转移能力的变化，评价miR33a和Twist1表达水平变化对NSCLC细胞EMT和转移的影响。结果（1）不同转移能力的NSCLC细胞中，其miR-33a的表达亦有显著性差异，miR-33a的表达与NSCLC细胞迁移能力呈负相关。（2）上调miR-33a表达引起上皮标志物CDH1表达增加，间叶标志物Vimentin表达下降，细胞迁移和浸润能力降低，即抑制细胞发生EMT和转移。（3）下调miR-33a表达则导致上皮标志物CDH1表达降低，间质标志物Vimentin表达上升，细胞迁移和浸润能力增强，即诱导细胞发生EMT和转移。（4）下调Twist1表达，CDH1表达增加，Vimentin表达降低，细胞迁移和浸润能力降低，即抑制细胞发生EMT和转移。（5）在NSCLC细胞中，miR-33a与Twist1表达呈显著负相关，并且miR-33a负调控Twist1的表达。（6） Twist1基因是miR-33a的直接作用靶点。结论（1） miR-33a表达与NSCLC细胞转移能力呈显著负相关；其异常表达与细胞发生EMT和转移有关。（2） miR-33a抑制NSCLC细胞的EMT和转移的作用机制可能是直接靶向调控转录因子Twist1的表达。（3） miR-33a可发挥抗转移作用，有可能成为未来晚期非小细胞肺癌患者治疗的潜在靶点。