论文部分内容阅读
华中枸骨Ilex centrochinensis,冬青科Aquifoliaceae冬青属植物Ilex。具有解毒、消肿止痛的作用,主要用于治疗肝炎、跌打损伤等,在土家族被广泛的应用于类风湿性关节炎。前期药理学发现华中枸骨叶的醇提物具有很好地抗炎活性。为了较好的开发利用土家药华中枸骨,本课题对此药叶中的化学成分和抗炎活性进行了系统的研究。为了研究华中枸骨叶的化学成分,利用反复硅胶柱色谱、MPLC、HPLC、LH-20、ODS、TLC等多种现代色谱分离技术,对乙酸乙酯部位进行系统分离纯化。通过理化性质和现代多种光谱技术手段(如1H-NMR、13C-NMR、IR、1H-1H COSY、HMBC、HSQC、HR-ESI-MS、UV、CD等)对它们进行了结构鉴定,共分离鉴定得到12个化合物,分别为:(2S)-7-甲氧基-3’,4’-二羟基-5,8醌黄烷(1),(2S,7"S)-7-甲氧基-3’,4’-二羟基-黄烷-[5,6-e]-(3",4"-二羟基苯基)-二羟基-7"(8" H)-吡喃酮(2),(2S,7"R)-7-甲氧基-3’,4-二羟基-黄烷-[5,6-e]-(3",4"-二羟基苯基)-二羟基-7"(8"H)-吡喃酮(3),熊果酸(4),(2S)-5-羟基-7,3’,4’-三甲氧基黄烷(5),山奈酚(6),(2S)-5,3’,4’-三羟基-7-甲氧基黄烷(7),3’,4’,5-三羟基-7-甲氧基-二氢黄酮(8),槲皮素(9),3’-甲氧基儿茶酚(10),3-O-a-L-阿拉伯糖基-19a-羟基-乌苏酸(11),胡萝卜苷(12),其中1,2,3为新化合物,8,10,11为首次从该植物中分离得到。为了评价筛选华中枸骨叶的抗炎活性物质基础,采用MTT法测定细胞毒性作用,分别采用脂多糖(LPS)诱导小鼠巨噬细胞RAW264.7细胞、肿瘤坏死因子(TNF-α)诱导人关节滑膜成纤维细胞MH7A细胞作为炎症模型,用Elisa试剂盒测定培养上清中炎症因子IL-1β释放和NO生成,筛选评价不同极性部位、总黄酮以及部分单体化合物的抗炎活性。结果表明:石油醚部位,乙酸乙酯部位,总黄酮分别给药浓度不超过100μg/ml,50 μg/ml,50 μg/ml对RAW264.7细胞无明显的毒性作用,给药浓度都为50 μg/mL时,它们均能显著抑制LPS诱导的RAW264.7炎症细胞NO的生成,抑制率分别为30.7%(**p<0.01),66.1%(<0.01),68.8%(**p<0.01);正丁醇部位和水部位给药不超过 10μg/ml对RAW264.7细胞无明显的毒性作用。给药浓度为10 μg/ml,正丁醇对LPS诱导RAW264.7炎症细胞NO的生成有一定的抑制作用,而水部位作用不明显;化合物1的给药浓度不超过8 μM时,对RAW264.7细胞无明显的毒性作用,在无毒计量范围内,它呈剂量依赖性抑制LPS诱导RAW264.7炎症细胞内NO的生成和IL-1β的释放。化合物1,7,8给药浓度分别不超过80,100,100 μM时,对MH7A细胞没有显著毒性。其中化合物1,7呈剂量依赖性降低TNF-α诱导MH7A细胞内NO的生成。因此,华中枸骨叶的石油醚部位,乙酸乙酯部位,总黄酮为其主要的抗炎活性部位,化合物1,7为华中枸骨叶抗炎的重要活性成分。