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先天性巨结肠症(Hirschsprung’s disesse,HD)于1886年由丹麦医生Harlald Hirschsprung首先描述。在先天性胃肠道畸形中发病率居第二位,占全部存活儿童的1/2000～5000,男性多于女性,男女之比约为3～5:1。HD在胚胎4-12周期间发生,主要原因是神经节细胞不能在肠壁定位。根据病变肠段不同可分为短段型,长段型,全结肠型以及全消化道型。主要特点是远端肠段神经节细胞减少。巨结肠同源病(allied Hirschsprung’s disorder,HAD)是临床表现酷似HD,但肠神经节细胞存在,仅在数量与质量上异常的疾病,其表现为神经节细胞减少症,神经节细胞不成熟症,神经节细胞异位症,巨大神经节细胞症。这类疾病以前认为发病较少,未引起重视,随着研究的深入和诊断手段的发展,发现其发病率高达先天性巨结肠的20%-75%。神经丝蛋白(Neurofilament protein, NFP)是一种细胞骨架蛋白,是神经丝(neurofilaments,NFs)的主要组成成分。NFs特异性分布于神经元和神经内分泌细胞的胞体及突起内。按分子量不同可分为三种亚单元,既分子量为68Kd的低分子量神经纤维丝(light neurofilament , NF-L),150Kd的中等分子量神经纤维丝(mid-size neurofilament, NF-M) , 200Kd的高分子量神经纤维丝(heavy- neurofilament, NF-H),每种亚单元都是单基因产物。在神经细胞发育(细胞生长、迁移、轴突和树突的发出)过程中,大分子物质和细胞器运送到其突起的分支,以及轴突与其他细胞建立功能性突触联系等均与NFs的功能有关。酪氨酸羟化酶(Tyrosine hydroxylase, TH)是去甲肾上腺素合成的限速酶,是交感神经标志物。肠壁内的神经支配有兴奋性的胆碱能神经和有抑制作用的肾上腺素能神经,正常结肠的外来神经为交感神经和副交感神经。交感神经末梢释放去甲肾上腺素,对胃肠道平滑肌作用是使其舒张。本实验采用免疫组织化学方法,观察HD、HAD及正常结肠组织中NFP、TH的表达情况,以探讨NFP、TH在肠神经发育中的作用和意义,同时进一步了解HD和HAD两者之间的联系和区别。实验以临床确诊的HD和HAD病例为模型,26例标本均来自同济医院病理科术后病理诊断的存档蜡块。其中HD15例,男12例,女3例;HAD11例,男8例,女3例,年龄1个月到9岁,每例采集狭窄段,扩张段组织蜡块个一块,每蜡块作连续切片3张,片厚6μm。同时取来自小儿外科非HD和HAD的正常结肠组织标本10例作为对照组,年龄3岁到8岁,取其结肠组织做石蜡切片。一抗为单克隆抗体,采用S-P免疫组化法,从两个方面观察二者的联系和区别。第一部分比较3组不同部位NFP阳性细胞和阳性纤维的表达状况:免疫组化法,每组取五张切片,每张切片在20×10倍显微镜下随机取5个视野,其图像经摄像仪输入电子计算机,经HMIAS-2000高清晰度彩色医学图文系统细胞测量程序处理,去除背景灰度,对其棕褐色反应产物的平均光密度进行统计学分析。第2部分重点观察神经递质的合成酶TH的表达:对3组不同的部位各取5个视野,其图像经摄像仪输入电子计算机,经HMIAS-2000高清晰度彩色医学图文系统细胞测量程序处理,去除背景灰度,对其棕褐色反应产物的平均光密度进行统计学分析,比较3组在TH表达上的差异。实验结果:①对照组正常肠段肌间神经丛中有大量NFP阳性纤维和NFP阳性神经细胞,阳性细胞突起少而粗短;HD狭窄段肠管肌间神经丛中未见NFP阳性细胞,但可见大量着色深的NFP阳性纤维;HAD狭窄段肌间神经丛中可见形态各异的NFP阳性细胞,细胞大,且着色深,突起多,丛中只见少量NFP阳性纤维。HD的扩张段和HAD的扩张段分别与正常结肠比较,NFP的表达无统计学意义(P>0.05);HD狭窄段分别与HAD狭窄段和正常结肠比较,NFP的表达均有差异(P<0.01);HAD狭窄段和正常结肠比较差异也有统计学意义(P<0.01)。②肌间神经丛和黏膜下神经丛TH阳性纤维在HD狭窄段分别与HAD狭窄段和对照组比较均有统计学意义(p<0.01);TH阳性纤维HAD狭窄段和对照组比较也有统计学意义(p<0.01)。实验结果提示HD和HAD的发病可能是由不同的机制所引起,其证据如下:①NFP在神经细胞发育过程中,细胞生长、迁移、轴突和树突的发出,把大分子物质和细胞器运送到其突起的分支,以及轴突与其他细胞建立功能性突触联系上有重要作用,其表达异常可能引起HD和HAD的发病,但机制可能不同。②HD的发病与NFP和TH这些结构蛋白和酶蛋白的表达增多有关;而HAD的发病可能与NFP和TH这些结构蛋白和酶蛋白的表达紊乱有关。