【目的】：
　　1.分析中国粤西地区汉族人群Sirtuin2基因非编码区rs2015，rs10410544，rs45592833单核苷酸多态性(SNPs)频率分布特点及与帕金森病(PD)发病的关系；
　　2.分析Sirtuin2rs2015位点与miRNA-8061的结合以及Sirtuin2rs2241703位点与miRNA-486-3p的结合，对SIRT2表达及其下游相关因子的影响。
　　【方法】：
　　1.以中国粤西地区汉族人群中222例PD病人(病例组)和161例健康体检者(对照组)为对象，采用RealtimePCR的方法检测病例组和对照组外周血SIRT2的mRNA表达水平并运用多重小测序技术（MultiplexSNaPshot）检测Sirtuin2基因SNPrs2015，rs10410544，rs45592833的基因型以及等位基因频率，并分析其与PD的关联。
　　2.构建psiCHECK-SIRT2-3’UTR双荧光素酶报告基因载体，将野生型和突变型SIRT2重组质粒分别与miR-8061、miR-4760-5p、miR-376a-5pmimics共转染293T细胞，检测miR-8061、miR-4760-5p、miR-376a-5p是否靶向结合SIRT2rs2015位点并通过3’UTR区调节SIRT2表达。
　　【结果】：
　　1.PD患者中SIRT2rs2015的基因型频率和显性模型，两组差异各自具有统计学意义(P=0.0431，P=0.0436)；而rs10410544，rs45592833基因型及等位基因在病例与对照两组间差异不具有统计学意义（P＞0.05）。
　　2.PD患者中SIRT2的mRNA表达水平明显高于对照组，两组差异有统计学意义(P＜0.05)；在病例组中TT基因型SIRT2mRNA表达量高于GG基因型，两组差异有统计学意义(P＜0.05);
　　3.通过生物信息学（MirSNP和PolymiRTS数据库）预测了可能靶向SIRT23UTR中SNPrs2015结合位点的三种miRNAs，miR-376a-5p，miR-4760-5p和miR-8061。
　　4.HEK-293T细胞中相对荧光素酶活性比较：miR-376a-5p，miR-4760-5p和miR-8061mimics分别与野生型psiCHECK-SIRT2(CAllele)和突变型psiCHECK-SIRT2(AAllele)共转染；相对荧光素酶活性比较：各组psiCHECK-SIRT2(CAllele)组和psiCHECK-SIRT2(AAllele)分别比较，发现共转染miR-8061这组有显著差异，具有统计学意义(P＜0.05)；共转染miR-376a-5p和miR-4760-5p这两组无明显差异，不具有统计学意义（P＞0.05）。
　　5.HEK-293T细胞中SIRT2mRNA表达水平的比较：miR-376a-5p，miR-4760-5p、miR-8061和miRNA-486-3p的mimics和inhibitors分别转染HEK-293T细胞，并通过qRT-PCR检测miR-376a-5p、miR-4760-5p、miR-8061、和miRNA-486-3p的相对含量以及SIRT2mRNA的相对表达水平，发现各mimics组、inhibitors组与control组相比miR-376a-5p、miR-4760-5p、miR-8061和miRNA-486-3p的表达水平均有差异，具有统计学意义(P＜0.05)，而SIRT2mRNA表达水平在miR-376a-5p、miR-4760-5p和miR-8061的mimics组、inhibitors组与control组相比中未见明显差异，不具有统计学意义（P＞0.05），但在miRNA-486-3p的mimics组、inhibitors组与control组相比中有显著差异，差异具有统计学意义（P＜0.01）。
　　6.SH-SY5Y细胞中SIRT2蛋白质表达水平的比较：miR-376a-5p，miR-4760-5p，miR-8061和miRNA-486-3p的mimics和inhibitors分别转染SH-SY5Y细胞，并通过western-blot检测SIRT2蛋白表达水平，发现miR-8061的mimics和inhibitor组与control组相比均有差异，miRNA-486-3p的mimics和inhibitor组与NC组相比有差异，差异均具有统计学意义(P＜0.05)。
　　7.Triton不溶性检测观察miRNA-486-3p对不可溶的a-syn聚集的影响：分别在SH-SY5Y细胞中转染a-syn及a-syn+miRNA-486-3p，48h后收集细胞，按triton不溶性方法检测a-syn蛋白总含量、不可溶及可溶a-syn蛋白含量，发现共转染了a-syn+miRNA-486-3p组相对只转染a-syn组，不可溶a-syn蛋白表达量显著减少。
　　8.免疫组织化学法观察miRNA-486-3p作用SIRT2rs2241703对a-syn聚集的影响：分别在瞬时表达a-syn（带绿色荧光蛋白标签）和synphilin的SH-SY5Y 细胞以及U87细胞中转染miRNA-486-3p和NC，48h后按免疫组织化学法于共聚焦显微镜（TCSSP5II，Leica）下观察a-syn分布及聚集情况，发现miRNA-486-3p显著减少a-syn聚集。
　　9.免疫组织化学法观察miRNA-486-3p对a-syn聚集引起的TH细胞毒性的影响：分别在SH-SY5Y细胞中空转（control）、过表达a-syn以及共转染a-syn和miRNA-486-3p，48h后按免疫组织化学法于荧光显微镜（EVOSflauto,life,USA）下观察TH阳性细胞（CY3染色）分布及聚集情况，分析其荧光强度，发现control组及共转染a-syn和miRNA-486-3p组TH+细胞荧光强度均显著高于过表达a-syn组，差异有统计学意义（P＜0.01，P＜0.05）.
　　10.MTT试剂体外分析细胞活力：用或不用NC、miR-486-3p、a-syn或MPP+处理SH-SY5Y细胞，每个孔加MTT溶液(PBS配制,浓度5mg/ml)20ul。再孵育4小时后停止培养,吸掉孔内培养上清液，每孔加150ulDMSO，振荡10分钟并进行比色分析（波长：490nm），发现转染了a-syn+miR-486-3p组较只转染a-syn组的SH-SY5Y细胞活力有显著增强，共转染a-syn+MPP+及miR-486-3p组较共转染a-syn+MPP+组SH-SY5Y细胞活力有显著增强，差异有统计学意义（P＜0.05，P＜0.01）。
　　【结论】：
　　1.Sirtuin2rs2015多态性与粤西汉族人群PD发病风险相关；而rs2015基因型TT可能是PD的遗传易感基因型。
　　2.Sirtuin2rs2015多态性影响miR-8061与SIRT2基因3’UTR的结合效率，在mRNA水平上没有显示调控作用，但在蛋白水平上可负性调节Sirtuin2蛋白表达水平，可能与PD发病相关。
　　3.Sirtuin2rs2241703多态性影响miR-486-3p靶向结合SIRT23’UTR的效率，从而负性调节SIRT2的蛋白表达水平；miR-486-3p在多种PD细胞模型中通过降低SIRT2表达从而减低a-syn聚集引起的神经毒性，对PD的发病病理有一定的挽救作用。