人类本身有比较完整的免疫系统,能通过自身的免疫系统抵御病原体及多种细菌等有害物质侵入。当人类机体有病毒入侵时,其免疫系统会快速的发生免疫反应将病原菌清除。免疫系统一般包括非特异性免疫和特异性免疫,而特异性免疫又分为体液免疫和细胞免疫。细胞免疫狭义点来说,仅指T细胞介导的免疫应答,这种免疫应答往往需要T细胞抗原受体(T cell receptor,TCR)的参与。因而将TCR参与的信号通路称为T细胞受体信号通路。T细胞受体是T细胞表面的特异性分子,能够特异识别T细胞表面的抗原的分子,是T细胞激活的核心。因为近十几年来肿瘤免疫治疗研究取得了一系列可喜的进展,这使得越来越多的科研工作者投入到对TCR信号通路的研究中。目前对于TCR信号通路的大部分分子的功能已经研究的比较透彻,但是新的调控分子发现得却越来越少。PDIA3分子是实验室成员基于质谱结果,在TCR复合物中新发现的一个分子。经查阅之前大部分有关PDIA3分子研究的文献发现,PDIA3主要参与到细胞信号转导、主要组织相容性复合物组装、血小板功能、转录、骨发育及凋亡诱导等多种生物学过程,但是关于PDIA3与TCR信号通路之间的关系几乎没有研究。鉴于T细胞受体信号通路在免疫应答中具有极其重要的作用以及PDIA3分子在免疫细胞中的高表达现象,因而对PDIA3分子与TCR信号通路之间的关系展开研究。本研究利用电转法将siRNA导入到Jurkat T细胞中,用CD3抗体和CD28抗体共同处理电转细胞,通过Western blotting检测LCK、ZAP70蛋白的磷酸化修饰水平,流式分析CD69表达水平,ELISA检测细胞因子IL-2的分泌情况,及荧光素酶报告基因系统检测NF-κB信号通路荧光强度。还对电转过程及抗体处理中的部分关键参数进行了摸索和优化,确定了电转缓冲液与siRNA的用量比接近为1:3、电转后的细胞立即放入37℃细胞培养箱中孵育40分钟为适宜条件,并根据不同的实验目的建立了抗体处理细胞的激活体系。接着利用建立的抗体激活体系检测到在Jurkat T细胞中PDIA3下调后导致有关TCR信号通路的关键蛋白LCK、ZAP70磷酸化修饰水平、T细胞激活的标志性分子CD69表达水平和细胞因子IL-2的分泌水平都明显降低,且对NF-κB的信号通路有一定的抑制作用。由此可见,PDIA3蛋白参与了T细胞TCR信号通路的调控,且对T细胞活化有一定的促进作用。