论文部分内容阅读
目的：探讨HGF/C-Met信号传导系统对肝细胞癌生长、侵袭和转移的影响及其作用机制。方法：将肝癌Hep3B细胞株按给予外源性HGF的剂量进行分组：不给予外源性HGF的为对照组，即A(0ng.ml-1)组；给予外源性HGF的为实验组1，并且按照外源性HGF的剂量将其分为B(5ng.ml-1)，C(10ng.ml-1)，D(15ng.ml-1)，E(20ng.ml-1)组。依照上述分组的方法将人正常肝细胞分为1，2，3，4，5组，其中1(0ng.ml-1)组为对照组2，2(5ng.ml-1)，3(10ng.ml-1)，4(15ng.ml-1)，5(20ng.ml-1)组为实验组2。检测肝癌Hep3B细胞株细胞生长曲线和离散情况比较实验组1和对照组1肝癌Hep3B细胞株细胞的增长与离散状况。检测人正常肝细胞生长曲线比较实验组2和对照组2人正常肝细胞的增长情况，同时比较肝癌Hep3B细胞株和人正常肝细胞相对应组之间的细胞增长情况。分别用酶联免疫吸附实验（ELISA）检测肝癌Hep3B细胞培养上清液中血管内皮生长因子（VEGF）的含量；用免疫组织化学技术（ABC法）测定肝癌Hep3B细胞中增殖细胞核抗原（PCNA）的表达情况，并计算增殖细胞核抗原标记指数（PCNA—LI）。从整体水平上研究HGF/c-met信号传导系统对肝癌细胞生长、侵袭和转移的影响及其作用机制。结果：1．外源性HGF浓度在1～15ng.ml-1时，肝癌Hep3B细胞增殖明显加快、细胞离散度增加并伴有细胞形态学的改变，同时HGF与细胞的增殖和离散度的增加呈剂量-效应关系，但是对照组1肝癌Hep3B细胞株较B，C，D实验组1细胞生长慢，并且与D组相比有显著性差异。当外源性HGF浓度为20ng.ml-1时，肝癌Hep3B细胞增殖停止，细胞趋于凋亡。而HGF浓度在1～20ng.ml-1时，人正常肝细胞的实验组2和对照组2细胞都处于持续性增长状态，其中以D组细胞增长最快，与其它组相比有显著性差异。2．肝癌Hep3B细胞培养上清液中，B，C，D实验组1较对照组1VEGF的OD值明显增高，并且有显著性安徽医科大学硕士学位论文差异；同时肝癌Hep3B细胞中，B，C，D组较对照组；PCNA十I也明显升高，其中D组 PCNA－LI最高，与对照组；和 B，C，E实验组；相比有显著性差异。而 E组中 VEGF的OD 值、PCNA－LI与对照组；个＊无明显差异。结论：HGF／c－met信号传导系统能促进肝癌细胞的生长、侵袭和转移，并受HGF浓度的影响，其作用机制可能与肝癌细胞的增殖、离散、VEGF及PCNA的表达有关。