胸腺是免疫器官的重要组成部分,在免疫系统中有着重要作用,胸腺中的活性物质多数以小分子多肽的形式存在,提取温度和细胞破碎程度对其活性都有影响。本文以新鲜小牛胸腺为原料提取胸腺小分子多肽,胸腺经低温研磨离心后,分为上清和沉淀两个组成部分,沉淀组分再经冰上裂解提取胞内物质,通过超滤、Sephadex-G50柱层析浓缩纯化胸腺粗品,电泳技术分析鉴定组分间蛋白表达差异,借助动物实验和细胞实验探究两种组分在抗肿瘤活性上的差别。本文首先探究了上清和沉淀组分纯化条件,通过控制超滤时间、柱层析上样量,发现上清组分最佳超滤时间为10 min,柱层析最佳上样量为5 mL,沉淀组分最佳超滤时间为5 min,柱层析上样量为10 mL,纯化后上清和沉淀组分中小分子蛋白含量分别为1.8 mg/mL和0.95 mg/mL,说明上清中小分子活性物质含量高于沉淀组分。其次,通过二维电泳技术研究了上清和沉淀组分蛋白质组学差异,发现了8个差异表达蛋白点,经质谱鉴定后,其中与抗肿瘤活性密切相关的蛋白点有6个,表达量上升的有 S100-A14、Cofilin 1(Non-muscle)、Cathelicidin-1、protein kinase C receptor,下调的有 60S ribosomal protein L37a、Histone H2A type 1。最后建立S180荷瘤小鼠模型,对两种组分体内抗肿瘤作用进行研究,确定上清组分的灌胃剂量为200 mg/kg.d,对S180荷瘤小鼠的抑瘤率为50%,沉淀组分灌胃剂量为200 mg/kg·d,对S180荷瘤小鼠的抑瘤率为40%,通过对小鼠脏器指数进行测定,发现两种组分均可抑制肿瘤细胞在体内的增殖,保护小鼠胸腺,脾脏等免疫器官。通过流式细胞术检测小鼠血液、胸腺、脾脏、实体瘤T、B淋巴细胞亚群及肿瘤细胞周期和凋亡率发现,上清组分对于提高体内CD4+T细胞比例、阻滞肿瘤细胞在G0/G1、诱导肿瘤细胞凋亡的作用效果要强于沉淀组分,同时上清组能更加显著地提高小鼠血液中IL-2、IL-6、IFN-γ、TNF-α水平,提高脾脏中NK细胞杀伤能力。由上述结果可知,相对于沉淀组分,上清组分中胸腺小分子多肽的含量更多、活性更强,能够更好地增强小鼠抗肿瘤免疫水平,抑制肿瘤细胞增殖。