连翘花粉活力、花粉形态及细胞培养研究

来源 :山西大学 | 被引量 : 4次 | 上传用户:zhiming2692
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药用植物种质资源的鉴定、筛选是品种培育的基础,也是中药现代化和中药材产业可持续发展的关键。细胞培养是实现药用植物合理保护、开发、利用的有效手段。连翘酯苷A是中药连翘的主要活性成分和连翘药材及其制剂的主要质量评价指标。本实验以我国的传统中药材及山西省的道地药材连翘为研究对象。(1)应用TTC染色法、I2-KI染色法和醋酸洋红染色法三种方法测定了正常的长花柱二雄蕊花、短花柱二雄蕊花及变异的长花柱三雄蕊花、短花柱三雄蕊花4种类型连翘花的花粉活力;(2)应用扫描电子显微镜观察了正常的四瓣短花柱二雄蕊花、四瓣长花柱二雄蕊及变异的四瓣短花柱一雄蕊花、四瓣长花柱一雄蕊花、三瓣短花柱三雄蕊花、四瓣短花柱四雄蕊花、四瓣短花柱三雄蕊花和四瓣长花柱三雄蕊花8种类型连翘花的花粉表面结构特征;(3)以入药器官连翘果实为外植体,以连翘酯苷A的生物合成量及细胞的生长量为主要的选择指标,进行了细胞悬浮培养。实验结果表明:(1)1%醋酸洋红染色法最适合于连翘花粉活力的检测;二雄蕊花的花粉活性高于三雄蕊花;当雄蕊数相同时,短花柱花的花粉活性高于长花柱花。(2)8种连翘花粉的一般形态特征为:花粉形状为近椭球形、椭球形或长椭球形;花粉外壁纹饰都为网状纹饰,网孔大小相近;都具有三孔沟,形状对称。连翘花粉均属于较小型花粉,8种类型在花粉粒大小、脊背宽等形态特征上存在一定的差异,可为连翘的进化过程提供证据。(3)0.3%HgCl2处理10 min对于青翘外植体的消毒效果最好;诱导青翘愈伤组织的适宜培养基配方为MS基本培养基+2.0 mg/L 2,4-D+0.5 mg/L 6-BA+ O.2 mg/L KT+3.0%蔗糖;连翘悬浮细胞培养的适宜培养基配方为B5基本培养基+2.0 mg/L 2,4-D+0.5 mg/L 6-BA+0.5 mg/L KT+3.0%蔗糖;当培养基中的NH4+/N03-为0/60.其他大量元素均保持原有浓度时,有利于悬浮细胞生长;连翘酯苷A积累适宜培养基配方为B5基本培养基+0.7 mG/L KT+1.5 mg/L 2,4-D+3.0%蔗糖;培养基的pH值为4.8-5.3时适合于连翘悬浮细胞的生长及连翘酯苷A的合成。对连翘细胞悬浮培养过程中细胞生长及基质消耗进行动态研究发现,连翘细胞的生长曲线基本呈“S”型,在整个生长过程中培养液的pH值在4.1-7.0之间变化,细胞的生长与碳、氮、磷元素的消耗规律相吻合。上述实验结果为应用细胞培养技术生产连翘有用成分提供了实验依据。
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