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辣椒是一种重要的蔬菜作物和调料品,营养丰富经济价值高,深受人们的喜爱。但由于各种病害的危害,辣椒的产量和品质受到严重的影响。因此提高辣椒抗病性是十分重要的研究课题,通过常规育种手段选育高抗、优质、高产品种难度大、耗时长。植物基因工程技术的发展与完善,为作物的遗传改良提供了新的策略和强有力的工具。辣椒基因工程方面的研究已经取得了一些成就,但进展缓慢,离体再生困难和遗传转化率太低是限制其发展的两大因素。本研究以产量较高的常规品种(保加利亚尖椒和赤研6号)的子叶为主要实验材料,分别就各种影响其离体再生的因素进行了研究,建立了辣椒植株再生和农杆菌转化辣椒的技术体系。在此基础上,将由抗真菌蛋白的几丁质酶(Chitinase,Chi.)基因、葡聚糖酶(β-1,3-Glucanase,Glu.)基因和萝卜抗真菌蛋白(Rs-AFP2)基因构建的三价表达载体转化辣椒,经Kan筛选、PCR分子检测、dot blotting和PCR-Southern blotting等分子检测,证实了外源基因已经整合到植株基因组DNA中。对辣椒离体子叶进行疫病病菌抗病性检测,证明转基因辣椒对辣椒疫病有很强的抗性。所获得的主要结果如下:1、辣椒高效离体再生体系a.保加利亚尖椒不定芽诱导分化培养基:MB+蔗糖30 gm+琼脂8g/L+LC 1.0 mg/L+IAA0.1 mg/L+ABA 0.3 mg/L+Spm 100μmol/L+AgNO3 5 mg/L+PD 6 ml/L(pH5.8~6.0),不定芽分化率达到100%,优胜芽率83.3%。不定芽伸长培养基:MB+蔗糖30g/L+琼脂8 g/L+LC 0.1 mg/L+IAA 0.2mg/L+GA3 1.0 mg/L+Spm 100μmol/L+AgNO3 5 mg/L+PD 6 ml/L(pH 5.8~6.0),不定芽伸长率达到78.5%。再生苗生根培养基:1/2 MS+蔗糖30g/L+琼脂8g/L+IAA 1.0 mg/L+NAA 0.5 mg/L(pH 5.8~6.0),再生苗生根率达到100%。b.赤研6号不定芽诱导分化培养基:MB+蔗糖30g/L+琼脂8g/L+LC 1.0 mg/L+IAA1.0 mg/L+ABA 0.3 mg/L+Spm 100μmol/L+AgNO3 5 mg/L+PD 6 ml/L(pH5.8~6.0),分化率达到100%,优胜芽率66.7%。不定芽伸长培养基:MB+蔗糖30g/L+琼脂8g/L+LC 0.2 mg/L+IAA 0.6mg/L+GA3 2.0 mg/L+Spm 100μmol/L+AgNO3 5 mg/L+PD 6 ml/L(pH 5.8~6.0),伸长率达到58.5%。再生苗生根培养基:1/2 MS+蔗糖30g/L+琼脂8 g/L+IAA0.2 mg/L+NAA 0.1 mg/L(pH 5.8~6.0),再生苗生根率达到100%。2、辣椒遗传转化体系在侵染液pH 5.2、预培养2 d、侵染时间7~8 min、无AS、共培养2 d的条件下为最优化的遗传转化体系。3、获得了辣椒转化植株将GCR三价载体转化辣椒,转化后再生的植株经PCR、dot blotting和PCR-Southern blotting检测,证实三个外源基因均已整合到辣椒基因组中。对辣椒离体叶片进行抗病性检测,结果证明转基因辣椒对辣椒疫病有很强的抗性。