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目的:灯盏乙素乙酯(DZY-02)为灯盏乙素(DZ)的衍生物,是治疗脑缺血的候选创新药物。药效学研究表明灯盏乙素乙酯(DZY-02)对改善大脑中动脉栓塞所致的大鼠神经症状行为和减少大鼠梗塞范围的强度均大于灯盏乙素(DZ),具有良好的开发前景。本论文研究的主要目的,是在课题组前期研究的基础上,对DZY-02原料药的有关物质及其吸收、代谢进行研究,并以此为基础开展制剂研究,为DZY-02的药物开发奠定基础和提供数据支撑。 方法:(1) DZY-02的含量测定及其有关物质研究:本文建立了测定DZY-02原料药主成分及其有关物质含量同时测定的HPLC方法,并采用UPLC-MS对其主要有关物质进行结构鉴定。(2)DZY-02肠吸收特性研究:采用大鼠在体单向肠灌流模型,HPLC法测定肠灌流液中DZY-02的浓度,分别考察3个剂量组DZY-02在十二指肠、空肠、回肠的吸收情况,以及P-gp和BCRP蛋白抑制剂对DZY-02吸收的影响。(3)DZY-02代谢研究:采用体外肝匀浆温孵的方法探讨了DZY-02的代谢产物及其生物转化途径,经UPLC-MS确定其代谢产物;此外收集了灌胃DZY-02后大鼠的尿液和粪便,对DZY-02原形排泄率进行了计算,并对其体内代谢物进行了鉴定。(4)DZY-02制剂研究:由于DZY-02为难溶性药物,其吸收的限速过程为溶解过程,本文采用液固压缩技术以提高DZY-02溶出度和溶解速率。在明确DZY-02基本的理化性质基础上,开展了DZY-02液固压缩片的处方与工艺研究。以溶解度为指标,筛选了液固压缩体系的液相组成;考察了不同载体材料、涂层材料对DZY-02液固片溶出行为的影响;对崩解剂的加入方法进行了研究,分别考察了崩解剂内加法、外加法和内外加法这三种加入方式对液固片剂溶出的影响;最后对影响液固片释药的重要参数——不同药液比及R值进行了优选。分别制备了不同的DZY-02液固处方,并对其进行溶出度研究。同时制备了DZY-02普通片,并以普通片的体外溶出曲线作参比,探讨液固压缩技术在改善DZY-02溶出方面的机制。 结果:(1)三批DZY-02原料药中DZY-02的含量分别为98.96±0.16%%,DZY-02原料药中共含有4个杂质,各杂质峰面积之和小于对照溶液主峰面积的1.5倍,各杂质峰面积均小于对照溶液主峰面积的l倍。通过对照品比对和有关物质峰的一级和二级质谱信息,共鉴定出了3个有关物质,分别为灯盏乙素,野黄芩素和灯盏甲素乙酯,另一个有关物质由于缺少质谱信息,暂未推出其结构。(2)通过对高、中、低三个浓度DZY-02在不同小肠段的吸收情况研究,发现在实验的质量浓度范围内,随着浓度的增加,DZY-02在不同肠段的吸收均有上升的趋势,在高浓度无饱和现象,但其吸收速率常数Ka和有效渗透系数Peff无显著性差异(P>0.05),且Peff大于0.2×10-4cm·s-1;另外,同一浓度下的DZY-02在十二指肠、空肠和回肠的Ka和Peff均无显著性差异(P>0.05);不同蛋白抑制剂对DZY-02吸收影响的结果显示盐酸维拉帕米和利血平对DZY-02在各肠段的吸收速率常数(Ka)和有效渗透系数(Peff)均无显著性差异(P>0.05)。(3)在体外肝匀浆中共检测并鉴定了包括原型在内的13个代谢产物,体内代谢结果显示,DZY-02在尿液中含量极少,几乎检测不到,在粪便中共检测到包括原型在内的4个代谢物。(4) DZY-02在PEG-400中溶解度最大;以Avicel(R) pH102作为载体材料,Syloid244FP作为涂层材料时DZY-02液固处方溶出行为最好;内加崩解剂时液固片剂溶出较好且方便;DZY-02液固片剂相对普通片溶出度显著提高。 结论:(1)该方法操作简便、快速、准确、灵敏度高,可用于灯盏乙素乙酯原料药的含量测定及有关物质的检查。(2) DZY-02为高渗透性药物,它可能以被动扩散的机制吸收进入体循环;DZY-02在小肠段均有吸收,且无特定吸收窗; DZY-02不是P-gp和BCRP的底物,对DZY-02的吸收无外排作用。(3) DZY-02在肝中的代谢途径主要是酯类水解、与葡萄糖、葡萄糖醛酸和氨基酸结合、还原反应、甲基化、去羟基化等;DZY-02主要以原型的方式从粪便排出。(4)最终确定了DZY-02液固压缩片的处方组成为:PEG-400为液相溶剂,Avicel(R) pH102和Syloid244FP分别作为载体材料和涂层材料。液固技术可以提高DZY-02的溶出度。随着药液比的增大,药物累积溶出降低;R值增大,药物累积溶出整体有增多的趋势,这与液固技术能够改善药物的润湿性和分散性,提高溶出比表面积有关。