研究背景及目的:骨肉瘤是最常见的原发性恶性骨肿瘤,好发于儿童和青少年,全球发病率约为每年每百万3.4例。虽然骨肉瘤治疗技术和手段一直在改进,但是自20世纪80年代现代化疗出现以来,骨肉瘤患者的预后一直相对停滞。因此,深入探讨骨肉瘤发生发展的分子调控机制,积极寻找新的治疗靶点对提高骨肉瘤患者预后具有重要的意义。本课题组前期收集3对骨肉瘤及肿瘤旁组织进行RNA测序,将差异表达基因与TARGET数据库中与骨肉瘤预后相关基因进行交集,筛选出靶基因—SPICE1。SPICE1（Spindle and centriole-associated protein 1）是一种中心粒和纺锤体相关蛋白,其功能主要是参与调节中心粒数量和长度,以及在纺锤体组织中发挥作用,目前关于SPICE1在肿瘤中的研究未见报道。我们前期研究首次发现SPICE1在骨肉瘤中高表达,并且与骨肉瘤患者不良预后正相关。因此,我们猜想SPICE1可能在骨肉瘤的进展中发挥重要作用。为验证此猜想,本研究拟通过体内、体外实验探索SPICE1在骨肉瘤中的作用及其分子机制。方法:首先,采用Western Blotting及RT-q PCR实验检测骨肉瘤和肿瘤旁组织以及骨肉瘤细胞系与人成骨细胞h FOB 1.19内SPICE1蛋白及m RNA表达量。其次,利用SPICE1过表达/干扰慢病毒载体构建过表达/干扰稳转细胞株,采用CCK8、克隆形成、Transwell侵袭迁移实验以及裸鼠皮下成瘤实验检测SPICE1在骨肉瘤中的生物学功能。最后,采用IP-MS技术,探索与SPICE1相互作用蛋白,并通过Co-IP实验、细胞免疫荧光实验、泛素化实验、蛋白降解实验等探索SPICE1促进骨肉瘤进展的分子机制。结果:1.SPICE1在骨肉瘤组织和细胞中高表达,并且与骨肉瘤患者不良预后正相关。2.SPICE1促进骨肉瘤细胞增殖和侵袭、迁移,并且SPICE1增强骨肉瘤细胞裸鼠皮下成瘤能力。3.SPICE1与FASN相互作用,且SPICE1正向调控FASN蛋白水平而不影响其m RNA水平,进而发现SPICE1通过抑制FASN泛素化降解从而稳定FASN。4.通过将IP-SPICE1、IP-FASN以及去泛素化酶数据集进行交集,三者相交筛选出唯一去泛素化酶—USP10。随后,证实USP10与SPICE1和FASN相互作用,且SPICE1招募USP10抑制FASN泛素化降解。5.干扰USP10或FASN抑制由SPICE1促进的骨肉瘤细胞增殖、侵袭、迁移以及裸鼠皮下成瘤。结论:1.SPICE1在骨肉瘤中高表达,并与骨肉瘤患者不良预后正相关。2.SPICE1促进骨肉瘤细胞增殖、侵袭、迁移以及裸鼠皮下成瘤。3.SPICE1招募USP10稳定FASN,促进骨肉瘤进展。