【摘 要】
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传染病的传播发展给养殖业带来巨大的经济损失,尤其是口蹄疫疾病的发生发展,它是最难控制的动物疫病之一,也是世界卫生组织法定报告的动物疫病,口蹄疫和塞内卡都属于小RNA病毒科的成员且临床症状极为相似很难进行鉴别。因此快速特异的诊断在疫病的预防中尤为重要。重组酶聚合酶扩增技术是基于核酸诊断技术中一项恒温检测的工具,能够在20min内常温条件下完成检测。本研究选择塞内卡和口蹄疫的保守区域3D基因设计合成引
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传染病的传播发展给养殖业带来巨大的经济损失,尤其是口蹄疫疾病的发生发展,它是最难控制的动物疫病之一,也是世界卫生组织法定报告的动物疫病,口蹄疫和塞内卡都属于小RNA病毒科的成员且临床症状极为相似很难进行鉴别。因此快速特异的诊断在疫病的预防中尤为重要。重组酶聚合酶扩增技术是基于核酸诊断技术中一项恒温检测的工具,能够在20min内常温条件下完成检测。本研究选择塞内卡和口蹄疫的保守区域3D基因设计合成引物和探针,建立了塞内卡和口蹄疫的快速实时荧光RPA检测方法,以及能够同时对这两种病毒同时检测的双重实时荧光RPA方法。本研究的具体内容如下:1、本研究以塞内卡的3D基因序列为目的基因设计合成了引物和探针,通过筛选出最佳引物对和优化反应条件,建立了可以快速检测塞内卡的实时荧光探针RPA的方法,其灵敏度可以检测到最低为10拷贝/μL,对其它病毒无扩增,有良好的特异性,利用建立的方法对相应的临床样品进行扩增,并与相对应的real-time q PCR比较,符合率为100%。2、本研究以口蹄疫病毒的3D基因序列为靶基因按照重组酶聚合酶引物探针的设计要求设计合成了引物和探针,通过筛选最佳引物对和优化反应条件,建立了可以快速检测口蹄疫的荧光探针RPA的方法,其灵敏度可以检测到最低为10拷贝/μL,对其它病毒无扩增有良好的特异性,利用建立的方法对相应的临床样品进行检测,并与相对应的real-time q PCR比较,检测结果一致。3、为了能够同时检测样品中的塞内卡和口蹄疫病毒,建立了塞内卡和口蹄疫双重实时荧光探针RPA的方法,其检测特异性试验结果表明,这两种检测方法均可以特异诊断塞内卡和口蹄疫,并对其他病毒无扩增,具有良好的特异性;敏感性试验结果显示其检测塞内卡为1000拷贝/μL口蹄疫灵敏度都为100拷贝/μL。
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