异种胰岛细胞分离及生物活性的实验研究

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目的探讨鱼纲(罗非鱼)、爬行纲(中华鳖)动物胰岛细胞分离、提取的方法及功能评价,为临床胰岛移植探索新的供体来源。方法采用胶原酶消化分离罗非鱼、中华鳖胰岛细胞,光镜下观察其形态结构;台盼蓝染色流检测细胞存活率;双硫腙(DTZ)染色,镜下计算分离胰岛的纯度;采用含10%胎牛血清、RPMI 1640培养液等培养胰岛细胞,在体外用不同浓度的葡萄糖刺激胰岛细胞,ELISA法测定其生物学活性。结果分离的罗非鱼、中华鳖胰岛细胞活度均大于90%,分离物中胰岛纯度均大于80%,罗非鱼、中华鳖胰岛细胞在体外对不同浓度的葡萄糖刺激具有明确的生物学反应,并随着葡萄糖浓度的增加胰岛素的产生也相应增加;二者胰岛细胞在同一时间组对不同浓度的葡萄糖刺激产生胰岛素具有量效关系(P<0.05),不同时间组间对同一浓度的葡萄糖刺激产生胰岛素无明显差异(P>0.05)。结论采用胶原酶消化分离罗非鱼、中华鳖胰岛细胞的方法可行,胰岛细胞在体外对不同浓度的葡萄糖刺激产生胰岛素并具有正相关;中华鳖胰岛细胞在相似条件下分泌胰岛素显著高于罗非鱼胰岛细胞,这体现了爬行纲动物胰岛较之鱼纲动物胰岛在生物进化上更高级,其为鱼纲、爬行纲与哺乳纲动物之间的胰岛细胞移植奠定了实验基础。
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