【摘 要】
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目的:应用比较蛋白质组学方法,观察同型半胱氨酸(Hcy)诱导血管平滑肌细胞(VSMC)增殖时VSMC内蛋白质的变化,以期为Hcy诱导VSMC增殖机制的探讨提供新的启示。方法:以Hcy诱导体外培
【出 处】
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中国人民解放军军事医学科学院 解放军军事医学科学院
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目的:应用比较蛋白质组学方法,观察同型半胱氨酸(Hcy)诱导血管平滑肌细胞(VSMC)增殖时VSMC内蛋白质的变化,以期为Hcy诱导VSMC增殖机制的探讨提供新的启示。方法:以Hcy诱导体外培养的VSMC增殖,流式细胞术和MTT法观察Hcy对VSMC增殖的影响,建立Hcy诱导大鼠VSMC增殖的模型。采用二维凝胶电泳(2-DE)技术,分离VSMC全细胞蛋白,建立Hcy诱导增殖的VSMC和正常VSMC蛋白质2-DE表达图谱,ImageMaster2DElite分析确认差异表达的蛋白;对差异表达的蛋白质点进行质谱鉴定;得到的肽质量指纹图谱,NCBInr数据库查询加以确认;并对差异表达的醛糖还原酶和丙酮酸激酶进行生物学功能确认。结果:Hey能诱导VSMC细胞显著增殖,诱导作用呈现时间和剂量的依赖关系。VSMC蛋白2-DE图谱可获得蛋白斑点1019±52个。平行图谱配比率达到84. 29%。比较正常VSMC与Hcy诱导后VSMC蛋白质2-DE图谱,发现了11个蛋白点发生明显而稳定的改变,其中3个在Hcy诱导的VSMC表达明显降低,8个明显升高;质谱鉴定后,9个蛋白得到确认,这些蛋白分别为:核纤层蛋白C、波形蛋白,LIM和SH3蛋白1、 Wdr1类似蛋白、醛糖还原酶、丙酮酸激酶M2、 磷酸丙糖异构酶和肌钙网蛋白,其中两个蛋白同为波形蛋白。Hcy诱导增殖的VSMC中醛糖还原酶和丙酮酸激酶的活性增加,其活性变化与其在2-DE图谱上表达量的变化一致,结论:在Hcy诱导VSMC增殖的过程中,糖代谢蛋白,细胞结构蛋白,肌钙网蛋白等蛋白表达量的变化,为探索Hcy诱导VSMC增殖机制提供了新的启示。
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