趋化因子CCL20刺激人结直肠癌细胞株Caco-2、SW480、LoVo诱导发生EMT的研究

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目的检测CCL20促进人结直肠癌细胞的迁移能力,并探讨CCL20是否诱导肠癌细胞的发生上皮-间质转化(epithelial to mesenchymal transition, EMT)。方法将处于对数生长期的人结直肠癌细胞株Caco-2(低恶度)、SW480(中恶度)和LoVo(高恶度)饥饿24h后,用CCL20(10ng/mL、100ng/mL和1000ng/mL)刺激细胞12h、24h,观察受试细胞是否发生形态学变化,并免疫组化(immunohistochemistry, IHC)、细胞免疫荧光染色(immunofluorescence, IMF)和蛋白质印迹(Western blot)等方法检测CCL20处理前后上皮表型相关蛋白E钙黏蛋白(E-cadherin, E-cad)、间质表型相关蛋白波形蛋白(vimentin, Vim)表达变化。采用Transwell小室进行CCL20刺激的细胞迁移实验(migration assay)和侵袭实验(invasion assay)。结果三株肠癌细胞经不同浓度CCL20处理在不同时间点被观察到细胞间距变松散的现象,但未出现细胞形态学的明显变化。应用IHC、IMF和Western blot等方法检测到这些细胞在经CCL20处理后E-cad、Vim具有不同程度的变化,但无统计学意义(P>0.05)。Transwell小室实验结果表明,CCL20刺激组细胞的迁移和侵袭能力较其他组增强,差异有统计学意义(P<0.01),并具有浓度依赖性。100ng/mL浓度CCL20的趋化能力较10ng/mL增强,差异有统计学意义(P<0.05),1000ng/mL与100ng/mLCCL20之间的差异也有统计学意义(P<0.05)。结论1.CCL20可以明显增强结直肠癌细胞的迁移和侵袭能力。2.CCL20不能诱导肠癌细胞发生EMT,而增强肠癌细胞迁移和侵袭的机制可能与EMT无关。
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