【摘 要】
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目的:探讨不同时间静脉注射人肝源性干细胞外泌体（Human liver stem cells-exosomes,HLSC-exo）对刀豆蛋白A（Con A）诱导的小鼠急性肝损伤的保护作用。方法:差速离心法提取HLSC-exo,Western检测其标志蛋白CD9、CD63的表达,NTA分析粒径分布;将56只C57BL/6雄性小鼠随机分为空白对照组（C组）、Con A组（M组）、HLSC-exo治疗组
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目的:探讨不同时间静脉注射人肝源性干细胞外泌体（Human liver stem cells-exosomes,HLSC-exo）对刀豆蛋白A（Con A）诱导的小鼠急性肝损伤的保护作用。方法:差速离心法提取HLSC-exo,Western检测其标志蛋白CD9、CD63的表达,NTA分析粒径分布;将56只C57BL/6雄性小鼠随机分为空白对照组（C组）、Con A组（M组）、HLSC-exo治疗组（E组）,M组和E组根据给予磷酸盐缓冲液（PBS）或HLSC-exo后再注射Con A间隔时间不同,分别分为3h（M1?E1）、6h（M2?E2）、12h（M3?E3）组,检测血清中ALT、AST、TNF-α、IL-10水平;比较各组小鼠肝脏大体形态及病理组织变化。计量资料多组间比较采用单因素方差分析,进一步两两比较采用LSD-t检验,P＜0.05为差异有统计学意义。结果:提取的HLSC-exo为直径90-110nm的囊泡体,电镜下可见清晰的“茶托样”结构,其特异性标志蛋白CD9和CD63均有明显的表达。C组小鼠ALT、AST、IL-10、TNF-α水平分别为31.81±6.74 U/L、69.75±8.30 U/L、313.51±10.97pg/ml、476.05±7.31pg/ml;M1-M3组ALT、AST、IL-10、TNF-α水平分别为1989.32±347.67U/L、2534.27±644.72U/L、266.20±8.15pg/ml、551.31±17.70pg/ml,2208.33±349.96U/L、2437.13±288.13U/L、264.41±9.12pg/ml、556.21±11.15pg/ml和2223.12±318.48U/L、2289.88±274.59U/L、260.23±4.56pg/ml、564.42±4.08pg/ml;E1-E3组ALT、AST、IL-10、TNF-α水平分别为225.58±115.59U/L、303.53±126.68U/L、331.61±10.46pg/ml、478.26±12.99pg/ml,1174.71±203.30U/L、1340.70±262.56U/L、288.13±10.74pg/ml、515.58±7.18pg/ml和1990.00±302.59U/L、2293.36±341.96U/L、260.10±7.25pg/ml、559.85±12.02g/ml;M组小鼠ALT、AST、TNF-α水平均高于C组,E1、E2组小鼠ALT、AST、TNF-α水平显著低于M1、M2组,且E1组比E2组更低（均P＜0.001）;E1、E2组小鼠IL-10水平高于M1、M2组（P＜0.001）;M3与E3组ALT、AST、TNF-α、IL-10水平均无统计学意义（均P＞0.05）。小鼠肝脏大体形态及病理显示E1、E2组肝细胞坏死程度较M1、M2组明显减轻,E1组肝小叶结构基本完整,仅可见散在点状坏死;E3组与M3组相比,肝细胞坏死无明显改善。结论:成体人肝源性干细胞外泌体静脉注射可以减轻Con A诱导的小鼠急性肝损伤,以提前3h注射保护作用最显著。通过调控细胞因子水平是其减轻肝损伤的重要机制之一。
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