波纹巴非蛤不同组织总类胡萝卜素含量比较及斧足颜色差异的转录组分析

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波纹巴非蛤是我国东南沿海重要的海产经济贝类之一,每年的产量约为10万吨。开展波纹巴非蛤不同组织总类胡萝卜素含量(TCC)以及斧足颜色差异分子机制的相关研究对波纹巴非蛤优良品种的选育具有重要意义。本论文首先对波纹巴非蛤各组织总类胡萝卜素含量进行检测,发现波纹巴非蛤斧足中总类胡萝卜素含量最高,然后进一步分析了斧足的颜色指标和总类胡萝卜素关系,并对不同颜色斧足进行了转录组分析。主要研究结果如下:1.随机选取波纹巴非蛤雌雄各30个,利用紫外分光光度法对斧足(Fo)、外套膜(Ma)、鳃(Gi)、闭壳肌(Ad)及性腺(Go)5个组织的总类胡萝卜素含量进行检测,结果显示:波纹巴非蛤5个组织的总类胡萝卜素含量除外套膜与鳃之间没有显著性差异外(P>0.05),其它各组织之间差异均达到极显著水平(P<0.01),各组织总类胡萝卜素含量从高到低依次为:斧足>性腺>外套膜>鳃>闭壳肌;不同性别波纹巴非蛤的斧足、外套膜、鳃、闭壳肌中总类胡萝卜素的含量没有显著性差异(P>0.05),但精巢中总类胡萝卜素的含量要显著高于卵巢(P<0.05)。本研究结果初步揭示了波纹巴非蛤体内总类胡萝卜素含量的分布规律。2.利用紫外分光光度法和色差仪法检测了91个波纹巴非蛤斧足的总类胡萝卜素含量和三个颜色指标L*(明暗度)、a*(红绿值)、b*(黄蓝值),发现波纹巴非蛤斧足的总类胡萝卜素含量和颜色指标L*、a*、b*之间相关极显著(P<0.01),相关系数分别为:-0.733、0.685、0.775。3.对波纹巴非蛤橘黄色和浅白色的斧足进行转录组测序、组装和注释分析。6个样品共获得48.22 Gb Clean Data,每个样品的Clean Data均超过6.75 Gb,Q30碱基百分比达到87.96%及以上。组装后共获得58159条Unigene,N50为1461,平均长度为889.51 bp,其中长度在1kb以上的Unigene有16647条。将得到的Unigene与PfamNR、COG、SwissProt、KEGG、KOG、和GO数据库进行比对,共获得19070条Unigene的注释结果。SSR分析共获得6946个SSR标记,差异表达基因筛选,共得到107个差异表达基因,橘黄色斧足组相对于浅白色组有74个基因表达上调,有33个基因表达下调。选取了12个与颜色有关的差异表达基因,进行荧光定量PCR验证,获得的差异基因表达量趋势与转录组测序结果基本一致。本结果初步阐述了造成波纹巴非蛤斧足颜色差异的分子机制,为后续功能基因的研究和分子育种提供重要的基础信息。
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