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目的:采用盲肠结扎穿孔的方法复制小鼠脓毒症动物模型,观察脓毒症时小鼠脾脏淋巴细胞凋亡的情况,检测内质网伴侣蛋白GRP78、CHOP基因mRNA及蛋白表达的变化,分析上述变化在脾淋巴细胞凋亡中的意义,以探讨内质网应激与脓毒症脾淋巴细胞异常凋亡之间的关系。方法:选择体重为18-25g、雄性、C57BL/6小鼠60只,随机分为假手术组(shamoperated group,sham)30只,模型组(cecal ligation and puncture group,CLP)30只。术前12小时禁食,采用乙醚全麻。Sham组麻醉后开腹翻动肠管寻找盲肠,但不做结扎和穿孔;CLP组开腹后找到盲肠,1号线行末端盲肠结扎,保留回盲瓣结构和血运,18号针于结扎盲肠上穿孔1个,挤出少量粪便均匀分布于结扎盲肠表面,结扎盲肠还纳腹腔后关腹,制成脓毒症的动物模型。所有动物术后即刻用0.5ml生理盐水皮下注射,进行液体复苏。每组动物随机等分,一半用于术后一般情况及生存率观察,绘制生存率曲线;另一半术后存活时间大于24小时者,于术后24小时麻醉活杀,剖腹观察腹腔情况后留取脾脏即刻液氮冻存和4%多聚甲醛固定,分别用于组织匀浆的制备和病理组织学检查。留取肝脏、肺、肠组织用于病理组织学检查。采用终末脱氧核糖核酸转移酶介导的原位缺口末端标记术(terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP nick end labeling,TUNEL)检测脾淋巴细胞凋亡情况。采用RT-PCR、免疫组化、Western Blot检测脾脏GRP78、CHOP基因mRNA及蛋白表达变化情况。SPSS11.5统计软件进行数据分析,所有实验数据以均数±标准差表示,以P＜0.05或P＜0.01作为差异有统计学意义。结果:1)脓毒症动物模型的确认施行CLP手术后的小鼠出现精神萎靡、嗜睡、反应迟钝、活动差、怕冷、聚居、竖毛、厌食、眼角分泌物增多等表现,24小时存活率达到93%左右,72h自然死亡率为33%。而Sham组术后表现与术前无异,且术后全部存活。多脏器组织病理切片检查提示与Sham组比较,CLP组小鼠的肺脏、肝脏、脾脏、肠组织存在不同程度的损伤。2)脾淋巴细胞凋亡情况Sham组脾脏白髓淋巴滤泡内出现少量、散在分布的凋亡淋巴细胞;CLP组脾脏白髓淋巴滤泡内则见大量、灶性分布的凋亡淋巴细胞。凋亡的严重程度以凋亡指数(Apoptosis Index,AI)计算,CLP组与Sham组比较(P＜0.01),差异具有统计学意义。3)脾组织GRP78的变化RT-PCR法检测脾组织GRP78mRNA表达情况:Sham组和CLP组小鼠脾组织均可检测到GRP78mRNA的表达,但CLP组小鼠脾组织GRP78mRNA相对表达水平明显高于Sham组(P＜0.05)。免疫组化与Western Blot检测脾组织GRP78蛋白的表达变化,表现为各组均有表达,但CLP组的表达量较Sham组增加(P＜0.05)。4)脾组织CHOP的变化RT-PCR检测脾组织CHOP mRNA的表达:Sham组CHOP mRNA表达较弱,而CLP组表达明显增强,其相对表达水平比较P＜0.05。免疫组化具有与WesternBlot相似的检测结果:CHOP蛋白的表达量在CLP组多于Sham组(P＜0.05)。结论:1)脓毒症脾淋巴细胞凋亡明显增加,不仅导致淋巴细胞数目减少,且凋亡细胞可通过造成免疫细胞无反应或抗炎细胞因子分泌等抑制机体免疫功能,成为脓毒症免疫抑制的重要机制。2)CLP组脾淋巴细胞GRP78mRNA和蛋白表达增加,表明脓毒症过程中由于缺氧、氧自由基释放及酸中毒等刺激,脾淋巴细胞启动内质网应激反应,通过上调内质网伴侣蛋白GRP78表达等机制力图纠正细胞功能紊乱。3)CLP组脾淋巴细胞CHOPmRNA和蛋白表达增加,提示内质网应激刺激过于强烈和持久,以致超过了内质网应激的代偿能力,因而启动凋亡程序导致细胞凋亡。4)内质网应激参与了脓毒症的发病过程,并通过内质网应激介导的凋亡信号通路诱导了脾淋巴细胞的异常凋亡,造成机体免疫功能抑制,从而加重了脓毒的病稗。