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自发性流产,又称自然流产,是人类妊娠最常见的并发症,指怀孕20周之前或者胎儿体重小于500g而终止妊娠。环境内分泌干扰物（Endocrine Disrupting Chemicals,EDCs）是一种外源性干扰内分泌系统的化学物质,与自发性流产有关。五氯酚（Pentachlorophenol,PCP）是一种环境内分泌干扰物。PCP是一种广谱、高效、廉价的除草剂、杀虫剂和防腐剂,在生活中广泛应用。本研究的目的是评估PCP与早期自发性流产的相关性,并探讨PCP致早期自发性流产的潜在机制。基于病例对照研究,通过超高效液相色谱串联质谱（Ultra Performance Liquid Chromatography electrospray tandem Masspectrometry,UPLC-MS/MS）检测孕妇尿液中PCP的含量,探讨孕妇PCP非职业暴露水平与早期自发性流产之间的关系。结果显示PCP的高暴露会增加早期自发性流产的发生风险（P<0.05）。为了验证PCP致早期自发性流产的分子机制,在ICR孕鼠模型中,孕鼠随机分为4组,按照0、0.02、0.2、2 mg/kg剂量灌胃染毒。在孕（Gestation day,GD）16.5天,胚胎植入数和胎盘重量没有差异。而在0.2和2 mg/kg PCP剂量组,胚胎的丢失率、异常胚胎数和吸收胎数增高。苏木精-伊红染色 （Hematoxylin-Eosin staining,HE）显示胎盘绒毛结构紊乱。进一步通过透射电子显微镜（Transmission electron microscope,TEM）观察胎盘,显示PCP剂量组的自噬小体增加。定量反转录聚合酶连锁反应（Real-time Polymerase chain reaction,RT-PCR）和Western Bolt结果均提示:p62和LC3-??/LC3-?的mRNA和蛋白在PCP暴露胎盘中表达增加,提示自噬的发生。Beclin 1的mRNA和蛋白表达增加,而Bcl2表达没有明显变化。根据生物信息学的预测,Beclin 1的靶miRNA为miR-30a家族。胎盘的RT-PCR结果显示PCP暴露导致miR-30a-5p表达下降,其他miR-30家族表达不变。细胞转染和荧光素酶报告基因实验证明Beclin 1和miR-30a-5p的结合。综上所述,PCP暴露可下调miR-30a-5p的表达,进而通过上调Beclin 1介导自噬,从而导致胚胎丢失。上述研究结果,将为PCP致胚胎毒性的机制研究提供依据。第一部分:五氯酚非职业暴露与自然流产的相关性研究目的 基于病例对照研究,探讨孕妇PCP非职业暴露与自然流产的关联。方法 1.利用UPLC-MS/MS检测孕妇尿液中PCP的暴露水平;2.根据PCP的暴露水平,将研究者分为三组,即低中高暴露组;3.用二元logistic回归分析孕妇PCP的暴露与自然流产的关联。结果 1.对照组和病例组PCP检出率分别为16.96%和32.86%,病例组PCP暴露水平显著高于对照组（P=0.007）;2.在未校正和校正协变量时,PCP高暴露组的女性发生自然流产的风险显著高于低暴露组,odds ratio（OR）（95%CI）分别为5.71（2.38,13.66）(P for trends<0.001)和3.79（1.17,12.31）(P for trends=0.046)。结论 妊娠早期,PCP的高暴露与早期自发性流产的发生显著相关。为PCP的生殖毒性提供流行病学的证据。第二部分:孕早期五氯酚暴露在胚胎丢失发生中的作用及其机制目的 基于PCP染毒孕鼠模型,探讨孕早期PCP暴露致胚胎丢失的可能机制。方法 1.ICR孕鼠孕GD 0.5-8.5进行PCP（0,0.02,0.2,2 mg/kg）灌胃染毒,观察PCP对孕鼠胚胎发育的影响;2.通过GD 16.5胎盘的HE染色切片和TEM,观察胎盘结构;3.通过RT-PCR和Western Blot检测胎盘自噬相关基因表达情况;4.通过靶基因mi RNA的预测网站,预测靶基因的mi RNA。采用细胞转染实验和双荧光素酶报告基因实验观察mi RNA与靶基因的结合。结果 1.在0.2和2 mg/kg PCP剂量组中,孕鼠GD 16.5胚胎丢失率、每胎的胚胎异常数和吸收胎数显著增加;2.HE染色切片显示PCP暴露组孕鼠的胎盘组织结构紊乱,进一步TEM观察显示PCP暴露组的胎盘自噬小体增加,表明PCP暴露后导致孕鼠自噬水平增加;3.RT-PCR和Western Blot检测结果显示:在0.2和2 mg/kg PCP剂量组,孕鼠胎盘的自噬水平显著升高,且Beclin 1为关键自噬作用靶点之一;4.通过生物信息学软件预测分析,Beclin 1与mi R-30家族存在靶向调控;5.RT-PCR结果显示0.2和2 mg/kg PCP剂量组的mi R-30a-5p表达下降;6.双荧光素酶报告基因实验证实Beclin 1与mi R-30a-5p的结合。结论 1.PCP的暴露导致ICR孕鼠的胚胎丢失率增加;2.PCP暴露可通过下调mi R-30a-5p,导致细胞自噬关键分子Beclin 1上调,进而引起孕鼠胎盘过度自噬,从而导致孕鼠胚胎丢失率增加,乃至孕鼠胚胎发育阻滞。