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结直肠癌(colorectal cancer,CRC)是全球发病率第3位的恶性肿瘤,每年新增发病人数1360,000,每年因CRC死亡人数694,000。在欧洲,CRC是居第二位恶性肿瘤,发病率为447/100,000。在中国,CRC无论发病率还是死亡率都是居前五位的恶性肿瘤,中国每年新诊断CRC病例数746,000,每年因CRC死亡人数694,000。大约有20%的CRC病人初诊时已伴有远处转移,只有10%～30%的远处转移患者有术切除原{灶和转移灶的机会。CRC的预后与分期相关,原位癌5年生存率可以达到90%,区域局限性病灶5年生存率亦有67%,但伴有远处转移的患者5年生存率只有10%。尽管CRC的诊断和治疗取得了很大进展,但其生存率改善不大,术后复发和转移仍然是临床面临的主要挑战。因此,寻找有价值的标志物,从而筛选患者并提供相应的靶向治疗措施以提高患者生存率就显得很有必要。αB-crystallin(AlphaB-crystallin,CRYAB,HSPB5)最早是在眼睛晶状体中发现的蛋白质,是小分子热休克蛋白家族成员(small Heat Shock Protein,sHsps)之一。CRYAB的主要功能,是作为分子伴侣,当细胞受到热休克、射线、氧化应激等损伤时,能够阻止受损伤的未折叠蛋白聚集,防止其降解,因而,具有促进细胞存活,抑制细胞凋亡的作用。近年来,CRYAB在肿瘤发生发展和侵袭转移中的作用受到越来越多的关注。研究发现,CRYAB在乳腺癌、头颈部癌、肾癌、甲状腺癌、胶质瘤、骨肉瘤、视网膜母细胞瘤等肿瘤中存在高表达,并且可能与肿瘤的预后相关。本研究:主要探讨CRYAB对CRC增殖、侵袭、转移的影响及相关机制研究。第一部分CRYAB在结直肠癌中表达与肿瘤的不良预后相关目的:研究CRYAB在结直肠癌(colorectal cancer,CRC)中的表达,并研究其与CRC的临床病理学关系。方法:收集18例CRC新鲜肿瘤组织和癌旁组织,100例CRC肿瘤组织和94例癌旁组织,并制成组织芯片(tissuemicroarrays,TMA)。实时荧光定量聚合酶链反应(quantitative real-time PCR,qPCR)检测18例CRC肿瘤组织和癌旁组织mRNA的表达,TMA用免疫组织化学(immunohistochcmistry,IHC)检测CRYAB蛋白的表达。结果:qPCR检测结果显示CRYAB mRNA及蛋白的表达在CRC肿瘤组织中显著高于癌旁组织。IHC检测结果显示CRC中CRYAB的表达与肿瘤的远处转移和远期生存相关。Kaplan-Meier和多因素生存分析提示高表达CRYAB与CRC的远处转移及预后不良相关。结论:CRYAB的表达与CRC的多个临床特征相关,可以作为CRC预后不良的一个评判指标。第二部分CRYAB的表达对CRC细胞株SW480生物学行为的影响目的:研究CRYAB的表达对CRC肿瘤细胞增殖、凋亡、细胞周期、侵袭性及裸鼠成瘤能力的影响。方法:用 qPCR 和 Western blot 检测 CRC 细胞株 HT29,SW480 和 HCT116 CRYAB mRNA和蛋白的表达。构建CRYAB干扰慢病毒载体,转染SW480细胞株。qPCR和Western blot检测干扰后SW480细胞(Si-CRYAB)CRYAB mRNA和蛋白的表达。生长曲线描绘细胞的增殖情况,transwell检测细胞的迁移能力,流式细胞仪(flow cytometry,FCM)检测凋亡和细胞周期,tunel检测细胞凋亡,裸鼠成瘤实验检测瘤细胞的成瘤能力。结果:qPCR和Western blot检测发现,SW480细胞株CRYAB mRNA和蛋白的表达高于HT29和HCT116细胞株,Si-CRYAB mRNA和蛋白的表达低于SW480和空载体对照(Control)。生长曲线提示Si-CRYAB瘤细胞增殖能力减弱,transwell检测发现Si-CRYAB迁移能力下降,FCM和tunel检测显示Si-CRYAB凋亡率增加,细胞发生G1期阻滞。裸鼠成瘤实验发现Si-CRYAB成瘤能力下降。结论:CRYAB的高表达能够促进CRC细胞株SW480的增殖、侵袭和细胞周期转化及裸鼠成瘤能力,并抑制SW480细胞株的凋亡。第三部分CRYAB促进CRC侵袭转移的相关机制研究目的:研究CRYAB的高表达促进CRC侵袭转移的相关机制。方法:收集甲醛固定、石蜡包埋的裸鼠成瘤的肿瘤标本和54例CRC标本,CRC标本被分为原位癌对照、浸润侵袭和肝转移3组。用IHC检测裸鼠成瘤肿瘤标本 CRYAB,p53,CD31,cyclin D1 和上皮间质转化(epithelial mesenchymal transition,EMT)标记 E-cadherin,fibronectin,vimentin,slug 的表达,并对 54 例CRC 肿瘤组织进行 E-cadherin,fibronectin,vimentin,slug IHC 染色。结果:裸鼠成瘤肿瘤组织 Si-CRYAB 组 CRYAB,cyclin D1,fibronectin,vimentin,slug的表达减少,E-cadherin的表达增加,p53,CD31的表达无显著变化。CRC肿瘤组织中浸润侵袭和肝转移组的fibronectin,vimentin,slug的表达高于对照组,E-cadherin的表达低于对照组。结论:CRYAB通过cyclinD1和EMT促进CRC的侵袭转移。