莠去津对中华绒螯蟹生精细胞的影响

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中华绒螯蟹(Eriocheir sinensis),俗称河蟹、大闸蟹,是我国重要的经济水产动物。本文以中华绒螯蟹为试验动物,采用莠去津(Atrazine,ATR)梯度暴露方式,利用流式细胞仪检测、透射电镜观察等技术方法,从生精细胞的细胞毒性、精子质膜完整性、精子顶体反应率及精子核染色质超微结构等方面,探究了不同试验浓度(0.001、0.01、0.1、1 mg/L)下,ATR对中华绒螯蟹生精细胞的生殖毒性效应。主要研究结果概括如下:1.乳酸脱氢酶细胞毒性检测结果显示:各ATR梯度暴露组生精细胞释放入培养基中的乳酸脱氢酶含量与对照组相比均无显著差异(P>0.05)。2.MTT法检测结果显示:ATR梯度暴露2 h时,各暴露组生精细胞的活力与对照组相比,均无显著差异(P>0.05)。3.ATR对中华绒螯蟹精子质膜完整性的影响试验中,采用二乙酸荧光素-碘化丙啶双染法对ATR梯度暴露后的中华绒螯蟹精子进行染色,流式细胞仪检测结果显示:各ATR暴露组精子质膜完整性较对照组无显著差异(P>0.05)。4.ATR对精子顶体反应率的影响试验中,采用伊红染色法观察统计结果显示:ATR暴露1 h时,各暴露组顶体反应率与对照组相比无显著差异(P>0.05)。5.ATR对中华绒螯蟹精子染色质的影响试验中,采用精子染色质扩散法处理ATR梯度暴露后的中华绒螯蟹精荚,并提取精子DNA进行琼脂糖凝胶电泳。结果显示:(1)与对照组精子染色质呈均匀有序的丝状相比,各暴露组染色质随着ATR浓度的增大,形态发生明显的改变,染色质丝大幅减少,呈现疏密不均、杂乱无序的分布状态,染色质凝聚现象随ATR剂量升高而加剧,电子密度较高的染色质团块数量增多,体积增大,在染色质间开始出现一些电子密度较低、染色质较少的区域,说明ATR对精子染色质超微结构有显著的破坏作用,且染色质受损精子率随ATR剂量的升高而增大,1 mg/L组受损精子率高达100%;(2)ATR梯度暴露后,中华绒螯蟹精子DNA琼脂糖凝胶电泳结果仅有一条带。综上,0.001、0.01、0.1、1 mg/L ATR对中华绒螯蟹生精细胞无明显细胞毒性,亦未影响其精子顶体反应率和质膜完整性,但ATR使精子染色质超微结构产生了显著变化,且变化程度随ATR浓度的升高而增大,说明ATR对雄性中华绒螯蟹具有一定的生殖毒性。
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