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背景:胃癌是我国消化道最常见的恶性肿瘤,同时胃癌引起的死亡在肿瘤引起相关死亡率中排第二位,而胃癌细胞发生侵袭和转移是引起胃癌患者死亡的主要原因因此,非常有必要对胃癌侵袭和转移机制进行探索。研究显示肌动蛋白调节蛋白(actin-binding protein,ABPs)调控的细胞骨架重塑导致的细胞迁移能力的增加是肿瘤细胞侵袭和转移的基础。肌动蛋白调节蛋白-1(Profilin-1,PFN1)是一种重要的肌动蛋白调节蛋白,已经被发现在多种恶性肿瘤中异常表达,并且异常表达的肌动蛋白调节蛋白-1与肿瘤的恶性程度和患者的预后有关联,但是在胃癌中,目前还不清楚它的表达状况和作用。因此,本研究拟探索肌动蛋白调节蛋白-1在胃癌中的表达和作用及相应的分子调控机制。方法:第一步确定表达及临床参数关系:构建含有75例胃癌及配对癌旁标本的组织芯片,运用免疫组化方法检测肌动蛋白调节蛋白-1在组织芯片中的表达情况,同时通过Western-blot和QRT-PCR检测肌动蛋白调节蛋白-1在18对新鲜胃癌组织和癌旁组织中的表达,对组织芯片免疫组化结果进行验证。通过对我科7株胃癌细胞株(10-TC,AGS,MKN28,BGC-803,BGC-823,SGC-7901,N87)和人胃黏膜永生细胞株(GES)进行Western-blot和QRT-PCR检测,进一步验证肌动蛋白调节蛋白-1在胃癌中的表达情况,然后通过组织芯片统计异常表达的肌动蛋白调节蛋白-1与临床参数包括年龄、年别、肿瘤位置、肿瘤大小、肿瘤分化程度、肿瘤浸润程度、淋巴结转移程度和肿瘤分期之间的关系。第二步生物学行为检测:筛选适合胃癌细胞株进行PFN1-SiRNA干扰,对干扰效果验证后,分别检测干扰组,NC组和对照组的细胞增殖,克隆形成,细胞周期,细胞凋亡,细胞迁移和细胞侵袭的情况,以探索它对胃癌细胞生物学行为功能的影响。第三步分子机制探讨:运用Western-blot和QRT-PCR检测整合素β(1integrinβ1)表达,并检测整合素β1的下游局部粘着斑激酶(FAK)及其相应的信号通路蛋白活性变化,最后通过纤维连接蛋白(FN)验证肌动蛋白调节蛋白-1调控的信号通路。结果:通过免疫组化检测75例胃癌组织芯片,我们发现有53/75(70.4%)例中肌动蛋白调节蛋白-1高表达,H评分统计分析显示肌动蛋白调节蛋白-1在胃癌中高表达(P<0.01),而后通过Western-blot和QRT-PCR检测18例胃癌新鲜标本和细胞株,我们也发现肌动蛋白调节蛋白-1在胃癌中表达高于相应癌旁正常组织,这进一步也验证了我们的结果,统计分析发现胃癌组织中高表达的肌动蛋白调节蛋白-1与肿瘤浸润程度(P<0.05)、淋巴结转移程度(P<0.05)和TNM分期相关(P<0.05)。对相对高表达的胃癌细胞株SGC-7901进行肌动蛋白调节蛋白-1干扰,发现可以沉默肌动蛋白调节蛋白-1可以通过诱导细胞周期G0/G1停滞来抑制胃癌细胞增殖,但是它对胃癌细胞凋亡没有影响。除此之外,干扰肌动蛋白调节蛋白-1表达还可以抑制胃癌细胞株SGC-7901中的迁移和侵袭,并且可以下调细胞中金属基质蛋白酶-2(MMP2)蛋白以及金属基质蛋白酶-9(MMP9)蛋白的表达。通过检测我们发现沉默肌动蛋白调节蛋白-1可能是通过下调整合素β1(integrin β1)表达从而抑制局部粘着斑激酶(FAK)及其下游PI3K/AKT/mTOR和ERK1/2/P38MAPK信号蛋白活性来影响胃癌细胞株的生物学行为功能的。最后,通过纤维连接蛋白(FN)验证肌动蛋白调节蛋白-1影响的信号通路。结论:本研究首次确定肌动蛋白调节蛋白-1在胃癌组织中高表达,同时高表达的肌动蛋白调节蛋白-1与肿瘤浸润程度、淋巴结转移程度和TNM分期相关。沉默肌动蛋白调节蛋白-1可以通过诱导细胞周期停滞抑制胃癌细胞的增殖,除此之外,沉默肌动蛋白调节蛋白-1还可以抑制胃癌细胞的侵袭和转移。最后我们推测肌动蛋白调节蛋白-1可能通过调控整合素β1表达影响局部粘着斑激酶(FAK)及其下游信号通路来影响胃癌发生发展的。