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柑橘属于亚热带常绿果树,是我国重要的经济果树之一,主要种植于多为酸性土壤的热带、亚热带和温带地区,容易遭受铝(Al)胁迫危害。通过前人研究报道及我们课题组前期蛋白质组学的研究,发现铝敏感蛋白3(ALS3)和肉桂醇脱氨酶(CAD)是柑橘根系中Al胁迫响应的两个关键蛋白,目前对于Al胁迫下ALS3和CAD这两个蛋白的作用机理尚未清楚。本研究以耐铝的雪柑和不耐铝的酸柚为材料,研究了Al毒下雪柑和酸柚生物量、光合速率、根系木质素含量等生理指标的变化;利用酵母双杂交试验筛选ALS3和CAD的互作蛋白,并利用双分子荧光互补(BiFC)、Western杂交和RT-qPCR等技术进一步验证候选互作蛋白的亚细胞定位和表达模式。得到的主要研究结果如下:(1)Al胁迫通过增加柑橘根系活性氧胁迫和木质化进而影响雪柑和酸柚的生长,研究结果表明Al毒害下,酸柚和雪柑的Fv/Fm和Fv’/Fm’值、ETR值均下降,而qNP、NPQ值增加,说明Al毒下雪柑和酸柚的光能利用率较低;此外Al处理增加了雪柑和酸柚根系的H2O2和木质素含量,与对照相比,酸柚根系的生物量明显下降且根系稀疏,根系积累大量的Al。这可能是Al毒害增加了雪柑和酸柚根部细胞壁中木质素的含量,增加根系积累Al,限制根部细胞的伸长从而损害根系抑制植物生长的原因。(2)以雪柑和酸柚根系cDNA为模板,通过RT-qPCR分析ALS3和CAD在转录水平的表达变化,并利用Western Blotting分析柑橘根系ALS3在Al处理前后的蛋白表达情况。结果表明,Al处理上调雪柑和酸柚中CAD的基因表达量;Al处理下雪柑和酸柚中的ALS3基因表达量和蛋白表达量均上调。(3)酵母双杂试验获得了15个与ALS3互作的蛋白,11个与CAD互作的蛋白。通过BiFC试验排除酵母双杂中的假阳性,进一步筛选验证获得6个与ALS3互作的蛋白,7个与CAD互作的蛋白。与ALS3互作的分别是谷胱甘肽-S-转移酶(GST)、V-ATP酶、质膜水通道蛋白PIPs(PIP2)、丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(UCT13)、假定的二氰氨基蓝铜蛋白(DCBC)、假定蛋白OSJNBb0071O21.22(UP2);与CAD互作的是GST、V-ATP酶、细胞色素P450蛋白、ALS3、PIP2、假定蛋白SB01G006870(UP1)和UP2。其中GST、V-ATPase、PIP2、UP2均与ALS3和CAD互作。RT-qPCR分析表明这些互作蛋白的基因表达量主要在Al处理下酸柚根系中上调表达,而在雪柑中变化不明显。总之,本研究从生理生化和分子层面探讨Al毒害对柑橘生长、根系木质素累积、Al胁迫相关蛋白ALS3和CAD互作蛋白及其调控机制,研究结果为进一步分析柑橘耐铝机制提供了候选蛋白/基因,为柑橘高产优质栽培提供科学依据。