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狂犬病目前仍然是一种严重危害公共安全的重大传染病，全世界每年有超过7万人因狂犬病死亡。最近几年我国狂犬病发病人数一直居高不下，每年约有3000人死于狂犬病，其中95%是由犬咬伤所致。因此，加强犬的免疫是防控我国狂犬病的重要手段。 本研究通过反向遗传操作技术，将犬的粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子GM-CSF克隆到狂犬病病毒LBNSE（来源于SAD-B19株）基因组中，获得重组狂犬病病毒并命名为LBNSE-dGM-CSF。重组狂犬病病毒LBNSE-dGM-CSF在NA和BSR细胞的生长特性与亲本病毒相似，说明外源基因的表达不影响重组狂犬病病毒的体外增殖，ELISA检测发现GM-CSF基因得到明显表达。将107FFU的重组狂犬病病毒LBNSE-dGM-CSF脑内注射小鼠后，小鼠无任何临床症状，表明该重组狂犬病病毒致病性低，安全性较好。将重组狂犬病病毒LBNSE-dGM-CSF和亲本病毒LBNSE对比格犬进行口服免疫,免疫3天后利用荧光定量PCR检测DC和B细胞表面共刺激分子mRNA表达水平，结果表明与免疫亲本病毒LBNSE的比格犬相比，免疫重组狂犬病病毒LBNSE-dGM-CSF的犬外周血中B细胞和DC细胞的表面共刺激分子mRNA水平显著上升。此外，重组狂犬病病毒LBNSE-dGM-CSF组的所有免疫比格犬的中和抗体滴度在第14d均高于0.5IU/mL，并在免疫后第28d抗体滴度达到最大值；而用母本毒株免疫的6只比格犬中只有2只在第14d抗体水平大于0.5 IU/mL，并且有一只比格犬到攻毒前（免疫后第35d）抗体水平一直低于0.5 IU/mL。口服免疫后第35d以4500 MICLD50（mouse intracerebral lethal dose50）的强毒株在咬肌和颞肌进行肌肉注射攻毒，攻毒后对照组全部发病死亡，而免疫组（包括亲本病毒免疫组LBNSE和重组狂犬病病毒LBNSE-dGM-CSF免疫组）均全部存活。总之，本研究说明表达犬GM-CSF的重组狂犬病病毒LBNSE-dGM-CSF在口服免疫比格犬以后可以诱导产生更高水平的中和抗体，是一株有效的犬用狂犬病口服疫苗候选株。