前言：　　宫颈癌是妇女生殖系统最常见的恶性肿瘤。近几年国外报道在普通人群中宫颈癌的发病率有所下降，但在发展中国家，宫颈癌的发病和病死率反而增加并有年轻化倾向。我国这一情况尤其明显，宫颈癌仍然是我国妇女健康和生命的主要威胁。虽然筛查和手术联合放化疗的模式已有效改善早期宫颈癌的预后，但转移、复发的宫颈癌却很难达到彻底根治。系统性研究宫颈癌的发生及侵袭转移的分子机制，对开展个体化诊治和靶向干预具有重要意义。　　高危人乳头瘤病毒（Human Papillomavirus，HPV）感染已被证实作为宫颈癌发生、发展的第一要素。但是仅仅有一小部分感染HPV的人发展成宫颈癌，有报道指出可能Wnt信号通路的异常激活为宫颈癌发生发展提供了“二次打击”。因此，学者提出了宫颈癌的阶梯式致癌理论。作为宫颈癌的激发因素，在宫颈癌的侵袭转移中又扮演何种角色，是尚待解决的科学问题。　　目前已发现的Wnt通路有:　　①经典通路(canonical Wnt signal pathway)，即Wnt/β-catenin信号通路，调节核内目的基因表达;　　②非经典通路(noncanonical Wnt signal pathway)，包括Wnt/Ca2+通路及Wnt/JNK信号通路。　　Wnt蛋白大致可分为两类:一类是Wnt1类，包括Wnt-1、Wnt-3a、Wnt-8a、Wnt-8b，可激活Wnt信号经典通路;另一类是Wnt5a类，包括Wnt-4、Wnt-5a、Wnt-11，可激活Wnt非经典通路。然而，近年来发现Wnt-5a类蛋白也可激活经典通路，从而导致β-catenin在细胞内的聚积。　　近年来研究发现，HPV感染人体后，编码E6E7致癌蛋白，并可以作用于p53蛋白，而p53与Wnt通路也密切相关。同时研究发现E6的异常表达以剂量依赖的方式激活Wnt-TCF信号，为HPV和Wnt通路提供了科学依据。　　Wnt-11作为Wnt通路的起始蛋白，最初是在研究斑马鱼原肠形成过程中提出，发现其能控制组织形态发生。近年来研究发现，Wnt-11不但与生长发育、细胞功能、坏死、凋亡等相关，甚至与肿瘤发生关系密切，它既可能作为癌基因，也可作为抑癌基因。研究表明Wnt-11可以激活非经典Wnt通路即Wnt/Ca2+和Wnt/PCP等途径。非经典通路可以诱导增殖、分化和参与前列腺癌的进展。Wnt非经典通路的下游因子主要是通过JNK发挥作用。而研究发现JNK信号通路能保护Siha细胞免受紫杉醇的影响而引起细胞凋亡，同时证明了JNK信号通路可能与宫颈癌耐药相关。JNK活性的增强能增加结直肠癌发生的速度。　　目前关于Wnt-11在宫颈癌中的表达及对宫颈癌发生发展的作用以及对肿瘤细胞生物学行为的影响尚未见报道。本课题旨在研究Wnt-11在宫颈癌组织中的表达作用情况，比较其与宫颈癌临床病理特征以及其与HPV E6的关系;Wnt-11的表达对宫颈癌细胞增殖及侵袭能力的影响及机制，为寻找宫颈癌治疗提供新思路。　　方法：　　一、Wnt-11在宫颈癌组织中的表达及与宫颈癌临床病理参数的关系　　应用免疫组化及Real-time PCR方法检测宫颈癌78例、CIN29例和正常宫颈组织24例中Wnt-11蛋白的表达，并探讨其与宫颈癌临床分期、病理分化类型及淋巴结转移、肿瘤大小、HPV感染状态等临床病理参数之间的关系。应用Western blot方法验证Wnt-11蛋白在宫颈癌组织中的表达。　　二、通过体外实验研究Wnt-11对宫颈癌细胞增殖及侵袭能力的影响　　Western blot方法检测宫颈癌细胞中Wnt-11的表达;构建Wnt-11shRNA及Wnt-11全基因组质粒;建立Wnt-11沉默及高表达细胞系;Western blot方法及实时定量PCR检测基因转染前后细胞中Wnt-11蛋白和mRNA的表达;CCK-8法检测细胞增殖活性;Transwell检测细胞侵袭能力;细胞周期方法检测细胞的增殖能力;细胞凋亡实验检测Wnt-11对细胞凋亡的影响。　　三、Wnt-11在宫颈癌细胞对Wnt通路的影响　　Wnt-11沉默及高表达细胞株建立后，应用Western blot方法检测转染前后宫颈癌细胞中Wnt经典通路中关键蛋白β-catenin以及非经典通路中关键蛋白JNK-1、p-JNK1的变化。　　四、Wnt-11与HPVE6蛋白在宫颈癌中的关系　　应用免疫组化及Real-time PCR方法检测78例宫颈癌、29例CIN和24例正常宫颈组织中HPV E6蛋白的表达，并探讨其与宫颈癌临床分期、病理分化类型及淋巴结转移、肿瘤大小、HPV感染状态等临床病理参数之间的关系，并且分析Wnt-11与HPV E6之间的关系。Wnt-11沉默及高表达细胞株建立后，应用Western blot方法检测转染前后宫颈癌细胞中HPV E6的变化。　　结果：　　一、Wnt-11在宫颈癌组织中表达　　正常宫颈上皮组织、宫颈上皮内瘤变和宫颈癌中的Wnt-11表达逐渐增高，三者间比较差异有统计学意义(P＜0.001)。宫颈癌组织中Wnt-11表达水平与宫颈癌的FIGO分期、淋巴结转移、肿瘤大小及HPV感染状态有关(P＜0.05)。但是与患者年龄、宫颈癌的分化程度及病理分化类型之间无明显统计学意义。　　二、Wnt-11对宫颈癌细胞增殖及侵袭能力的影响　　pcDNA3.1-Wnt-11转染Siha细胞后Wnt-11蛋白表达明显高于对照组;而沉默Wnt-11的Hela细胞的Wnt-11蛋白表达明显低于对照组;CCK-8结果显示，高表达Wnt-11的Siha细胞增殖能力增强，而沉默Wnt-11的Hela细胞增殖能力受到抑制，差异具有统计学意义(P＜0.05）;细胞侵袭实验结果显示，高表达Wnt-11的Siha细胞的穿膜细胞数明显高于空质粒对照组;而沉默Wnt-11的Hela细胞的穿膜细胞数明显低于空质粒对照组;细胞周期检测结果显示，高表达了Wnt-11的Siha细胞中处于S期的细胞数目明显高于空质粒对照组;而沉默Wnt-11的Hela细胞中处于S期的细胞数目明显低于空质粒对照组;细胞凋亡结果显示，高表达Wnt-11的Siha细胞的凋亡细胞数明显低于空质粒对照组;而沉默Wnt-11的Hela细胞的凋亡细胞数明显高于空质粒对照组。　　三、Wnt-11促进宫颈癌增殖及侵袭的机制　　在Wnt-11沉默细胞模型中，Wnt-11沉默组Wnt-11蛋白表达量较空白质粒组蛋白降低，而高表达Wnt-11的细胞中Wnt-11蛋白表达量较空白质粒组蛋白增高;HPVE6蛋白在沉默组表达量较空白质粒组低，而高表达Wnt-11的细胞中HPVE6蛋白表达量较空白质粒组蛋白增高;p-JNK1蛋白在沉默组表达量较空白质粒组低，而高表达Wnt-11的细胞中p-JNK1蛋白表达量较空白质粒组蛋白增高;而β-catenin以及JNK-1蛋白的表达量在两组之间没有明显区别，免疫组化方法检测131例宫颈组织的HPVE6蛋白的表达，其中宫颈癌78例，CIN29例，正常宫颈标本24例，提示宫颈癌组织中HPVE6表达水平与宫颈癌的临床病例因素如FIGO分期、淋巴结转移、肿瘤大小相关。但是与宫颈癌的分化程度及病理类型、年龄之间无明显统计学意义。但是HPVE6与Wnt-11存在正相关关系。　　结论：　　一、Wnt-11表达随着宫颈病变的进展逐渐增高。提示Wnt-11的表达增高可能是宫颈癌发生发展的机制之一。Wnt-11阳性表达率与宫颈癌的FIGO分期及淋巴结转移及HPV相关，提示Wnt-11表达上调与宫颈癌的不良预后相关。　　二、Wnt-11能显著促进细胞增殖和生长。Wnt-11能显著促进宫颈癌细胞的侵袭能力。Wnt-11能显著减少细胞的凋亡。　　三、Wnt-11能激活Wnt非经典通路，但是对经典Wnt通路没有作用。组织中Wnt-11与HPV E6表达随着宫颈病变的进展逐渐增高。两者表达部位相同，SPSS结果显示两者间存在正相关的关系。