非凝聚态Aβ25-35对新生大鼠海马CA3区锥体神经元钾离子通道影响的膜片钳研究

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[目的] Alzheimer’s病(AD)是影响记忆和认知功能的进行性退行性神经病变,是痴呆最常见的原因。β淀粉样蛋白(Ap)增加是AD中枢病因性过程,凝聚态Aβ具有明确的神经毒性作用,但有人提出,非凝聚态Aβ可能也具有神经毒性作用。 本论文研究了非凝聚态Aβ25-35对新生大鼠海马CA3区锥体神经元瞬时外向钾电流IA和延迟整流钾电流IK的影响,探讨电压门控性钾通道在AD发病机制中的作用,从而为应用钾通道调节剂预防和治疗AD提供理论依据。 [方法] 采用酶解和机械分离相结合的方法,急性分离新生大鼠海马CA3区锥体神经元细胞。运用膜片钳技术,记录锥体神经元全细胞跨膜总电流、全细胞内向电流、全细胞外向电流、全细胞IA和IK电流,并分别对IA和IK时间过程、电压—电流关系和动力学特性等正常电生理学特征进行分析。然后用单管加药装置,采用急性细胞外加药的方法,分别记录加入不同浓度非凝聚态Aβ25-35对IA和IK各项电生理指标的影响,所有结果均用相应计算机软件进行分析。 [结果] 1.分离得到的单个海马锥体神经元,胞体呈锥形或三角形,有较长的突起,细胞表面光洁,有较强的光晕,立体感强,贴壁良好,可存活4~6h。
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