miRNA是一种广泛存在于真核生物体内的短小RNA分子,长度约16-22nt。可以通过与mRNA序列互补阻遏蛋白翻译,从而调控蛋白表达进而影响生物学功能。自1993年被发现以来,miRNA越来越受到科研工作者的广泛关注,目前已经证实,miRNA在细胞分化、增殖、凋亡,生物体发育及多种生物学过程中都起着非常重要的调控作用。而不仅是生理状态,miRNA在多种疾病的发生发展过程中起到的作用也在近年来进行了广泛而深入的探索。而随着血清中稳定存在的miRNA的发现,血清miRNA表达谱作为生物标志物用于多种肿瘤及重大疾病的诊断也成了该领域中近年来的一大热点。其实,不仅是血清,人的其他体液如尿液、汗液、唾液等中同样存在稳定表达的miRNA。因此这些miRNA在某些特定条件下也有望成为很好的诊断标志物。本文旨在以干扰素治疗乙肝疗效预测及肾损伤的诊断为例研究体液miRNA作为分子标志物在临床诊断上的应用以及以miR-203靶向于SRC蛋白为例研究miRNA在肺癌发生发展中的作用。乙型肝炎是一种分布极广的传染性疾病,因此慢性乙肝的治疗也因其受众广、难治愈、易复发而成为医学界的一个难题。除传统医学的中草药外,目前明确有效成分的临床应用乙肝治疗药物主要有核苷类似物和干扰素两种。前者是针对病毒复制而设计的药物,短期抗病毒效果好,副作用小,但长期使用容易产生耐药,易复发；后者作为一种经典的抗病毒药物,通过调节自身免疫达到抗病毒的目的,其疗效稳定,不易复发,不会产生耐药,但其疗效与个体差异关系较大,仅有40%左右的人群使用该药物有效,且其副作用较大。因此,对于干扰素来说,用药前的疗效预测非常重要。此部分研究旨在研究血清miRNA作为生物标志物用于干扰素a治疗乙肝病人的疗效预测,以期为临床用药提供参考。课题组在前人的基础上,尝试寻找一种用于预测干扰素治疗乙肝疗效的特征性miRNA表达谱。我们收集了108例干扰素治疗前的乙肝病人血清,并通过跟踪其治疗后的血液生化指标将其分为有效组和无效组。运用microRNA array高通量筛选出两组差异表达的miRNA,再以实时荧光定量PCR(qRT-PCR)验证芯片结果。我们发现,miR-99a作为血清的分子标志物,对干扰素疗效的预测的ROC曲线下面积可达0.74,有望作为临床干扰素治疗乙肝的分子标志物。除血清外,人的其他体液中也有稳定存在的miRNA,但以这些体液作为生物标志物的研究尚少。而尿液作为一种更方便收集的体液,收集过程对患者无损伤、且与肾脏关系密切,因此是肾病诊断的理想媒介。肾病的发生往往伴随着肾损伤,轻度肾损伤由于症状较轻往往不易察觉,从而成为重大肾病的隐患。因此肾损伤的早期诊断很重要。目前临床肾损伤的诊断采用的主要是以肌酐、尿量为指标的诊断标准,但这两者均受多种因素影响,缺乏特异性,并且难以制定一个统一的客观标准。因此寻找一个敏感特异的肾脏早期损伤的生物标志物对肾损伤进行早期预测,以便于及时采取有效手段进行治疗显得极为必要。此部分旨在筛选出理想的尿液miRNA作为肾损伤标志物,以期为临床肾损伤的诊断提供参考。我们通过缺血再灌注以及链脲霉素(streptozotocin, STZ)分别对小鼠进行造模,以模拟急性和慢性肾损伤,并用组织切片病理学对造模结果进行了鉴定。通过实时荧光定量PCR手段,我们筛选了组织特异性miRNA,我们发现miR-10a和miR-30d能够作为肾损伤的标志物,并且比临床所用的血尿氮更为灵敏。接下来我们检测了局段节灶性肾小球硬化(focal segmental glomerulosclerosis, FSGS)的病人尿液与正常人尿液,发现miR-10a和miR-30d在病人尿液中有明显升高,进一步验证miR-10a和miR-30d的确可以作为良好的肾损伤标志物。miRNA除了可以作为稳定的生物标志物,在肿瘤的发生发展过程中也起了非常重要的作用。肺癌是世界范围肿瘤相关性死亡的主要病因,其死亡率居恶性肿瘤死亡率之首。目前的治疗方法主要是以手术治疗、放射治疗和药物治疗为主。有效的抗肿瘤药物的开发一直是科学界的焦点。Src蛋白是一种非受体酪氨酸蛋白激酶,由原癌基因c-Src编码,在肿瘤的发生、发展和转移中具有重要作用,体外实验表明抑制Src对肺癌患者有效。我们通过生物信息学方法,寻找到miR-203可以靶向于Src蛋白的3’非翻译区(Untranslated region, UTR)的四个结合位点。同时我们收集了6对肺癌和正常肺组织标本,检测了Src蛋白、mRNA和miR-203的表达情况,发现在肺癌组织中,Src蛋白显著上升、mRNA没有显著变化,而miR-203明显降低。并且Src蛋白的表达量与miR-203呈现皮尔森负相关。接着我们用荧光素酶(Luciferase)实验验证了miR-203对SRC的直接靶向作用,并用细胞功能实验验证了miR-203可以抑制肺癌细胞的迁移和增殖,并促进其凋亡。