水稻中一个新的CC-NB-LRR类R基因NRTP1的图位克隆与功能初探

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本文通过对构建的kasalath背景的大规模EMS诱变的籼稻突变体库的筛选,我们鉴定到一个短根突变体nrtp1。最初鉴定到的nrtp1是一个杂合态的突变体,其自交F2代出现三种表型,其相应的纯合突变体表型严重,根部总长度不足0.5cm,且无法长成成熟植株,有纯合致死效应。遗传分析表明nrtp1突变体是由一个单基因控制的半显性突变体。Evans blue染色和根尖的树脂切片表明突变体在根尖生长点和侧根冠的细胞死亡严重。通过图位克隆的方法,我们将NRTP1基因定位于第12条染色体上,在基因(Os12g17410)ATG后1166bp处的碱基由A突变成G,使其编码的天门冬氨酸(Asp)突变为甘氨酸(Gly)。我们对突变位点进行酶切鉴定,证实该位点有突变。NRTP1基因编码一个典型的CC-NB-LRR类R蛋白,故我们推测该突变基因与抗病相关。抗病相关的基因的RT-PCR结果发现PR10a和PBZ1的表达量在突变体中最高,表明该突变基因确实与抗病相关。然后我们构建了NRTP1基因超表达载体,以及启动子融合GUS载体并进行了转基因实验,筛选转基因成功的植株进行种植,待收获种子后进行后续的功能研究。同时我们还构建了NRTP1基因与GFP融合表达载体,为以后更好的研究NRTP1基因的功能打下基础。
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