TTV和有关TTV新变种的基因异质性和TTV在恒河猴实验感染的组织嗜性的研究

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TTV有着不同于其它DNA病毒的不寻常程度的基因异质性。为了研究TTV的新变种,我们收集了中国大陆不同地区的不同人群的血清,利用TTV原型TA278的引物,经PCR扩增,得到约3244bp的片段。12株ORF1的核苷酸序列进行最大同源性的对准比较,得到了这12株TTV的无根进化树。按照它们的遗传距离,这12株分属于8个不同的组(A—H),其中TCHNH1属于TTV基因1a型,TCHNA与GENEBANK注册的TUS01遗传距离最近,TCHNG2与GENEBANK注册的SANBAN遗传距离最近。这些TTV新变种与TA278的遗传距离超过0.41(TCHNH1除外);TCHNA、TCHNB与TUS01遗传距离分别为0.22、0.41;TCHNF、TCHNG1、TCHNG2与SANBAN的遗传距离分别是0.36、0.30、0.11;各小组间的遗传距离(TCHNC1与TCHNC2、TCHND1与TCHND2、TCHNE1与TCHNE2、TCHNG1与TCHNG2)分别为0.30、0.22、0.04、0.30。ORF1编码426~780个氨基酸,ORF2编码141~156个氨基酸。ORF1 ATG启始密码子附近有类似真核蛋白质翻译起始的共同序列(ACCATGG),ORF1终止密码子的下游都有一个保守的真核mRNA的polyA加尾信号序列(AATAA)。12株ORF1与TA278的核苷酸序列同源性为48.3-55.0%(TCHNH1除外);ORF1氨基酸与TA278的同源性为36.2-48.9%(TCHNH1为96.0%),ORF2氨基酸与TA278的同源性为40.0%-46.2%(TCHNH1为94.0%),氨基酸同源性低于核苷酸序列同源性。ORF1的前65个氨基酸富含精氨酸,同源性也高达56.5%~70.0%;第286~403氨基酸区域是一高变区,同源性只有17.7%~27.0%;与TA278相比,ORF1氨基酸许多位点存在缺失或者插入,只有65-273,401-491和611-674位点之间没有缺失或插入。尽管氨基酸同源性非常低,但是所有ORF1蛋白和ORF2蛋白都有非常相似的亲水性特征。所有ORF1蛋白有1~9个糖基化位点,一个YXXK的复制酶基序(亚单位结构域),多个激酶磷酸化位点,ORF1蛋白可能为TTV的核衣壳蛋白;而ORF2蛋白有类似CAV ORF2的基序(W-X7-H-X3-C-X1-C-X5-H)。总之,尽管这些序列的高度异质性,但是它们都有相似的基因组结构,相似的阅读框,相似的亲水性特征和共同的基序(亚单位结构域),因此这些不同的TTV或者TTV-like病毒可能属于我们至今仍不甚了解的新的病毒家族。 我们曾经报道过TTV可能通过肠道传播引起类似肝炎的疾病暴发,我们也在猴子的实验感染中证实了TTV的肠道传播。为了确定TTV的特异的组织嗜性,在感染了TTV的猴子病毒血症期间,收集猴子的各种组织,通过单/双链探针的斑点杂交,检测病毒DNA在各种组织中的存在形式。由于病毒DNA的极性,正义DNA可能是病毒的复制中间体。在斑点杂交实验中,我们检测到猴于的肝脏、小肠和骨髓组织有正义 DNA。而且我们检测到肝脏中病毒量是血清中的 13.2~78*倍。因此肝、骨髓和小肠可能是病毒的复制场所,故TTV可能具嗜肝性。
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