沙棘根瘤内生细菌胞外多糖对重金属吸附作用的研究

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植物内生细菌作为一大类特殊生境微生物,其代谢产物具有多种生物学功能,其中,胞外多糖(Exopolysaccharide,EPS)因具有对重金属离子的吸附活性,而在污水处理等环境保护领域具有重要的利用价值。本研究以6株产胞外多糖的沙棘根瘤内生细菌为材料,采用苯酚-硫酸法和3,5-二硝基水杨酸法(DNS法)测定菌株的胞外多糖产量,从而筛选出具有高产胞外多糖能力的菌株。利用形态学观察、生理生化试验以及16S rRNA基因序列分析,对高产菌株进行鉴定。利用单因素试验法与正交试验法对高产胞外多糖菌株的发酵条件进行优化,以期大幅提高胞外多糖的产量,用于重金属离子的吸附。利用过滤离心法和水提醇沉法提取菌株发酵液中的胞外多糖。经旋蒸浓缩和真空冷冻干燥后,得到胞外多糖粗提物。利用Sevag法和层析法对胞外多糖粗提物进行纯化,得到胞外多糖提纯样品。利用不同试样对四种重金属离子进行吸附,选择吸附效果最佳的试样进行后续试验。利用单因素试验法和响应面法优化重金属离子的吸附条件,从而提高重金属离子的清除效率。本研究主要结果如下:从6株产胞外多糖沙棘根瘤内生细菌中,筛选得到1株具有高产胞外多糖能力的菌株TT207。结合形态学特征、生理生化试验结果以及16S rRNA基因序列分析,将菌株TT207鉴定为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)。利用单因素试验法得到菌株TT207的最适发酵条件为:培养时间48 h、培养温度34℃、初始pH 6.5、接种量4%、装液量70 mL/250 mL、摇床转速140r/min。在此条件下,利用正交试验法确定菌株TT207的最适发酵培养基为:蔗糖50 g/L、KNO3 10 g/L、KH2PO4 8 g/L。经优化,菌株TT207的EPS产量较优化前提高了6.04倍。对发酵液中的胞外多糖进行分离提纯,测得粗提样品中EPS的含量为83.12%;提纯样品中EPS的含量为95.72%;经提纯,EPS提纯率达到13.16%。分别用含菌发酵液、菌体、粗提EPS和提纯EPS四种试样对Pb2+、Cu2+、Zn2+和Cd2+四种重金属离子进行吸附,结果表明,粗提EPS对四种重金属离子的吸附效果最佳。利用单因素试验法和响应面法确定粗提EPS对四种重金属离子的最佳吸附条件,结果表明,粗提EPS对四种重金属离子的吸附效果依次为:Pb2+>Cu2+>Zn2+>Cd2+。优化后,Pb2+、Cu2+、Zn2+和Cd2+四种重金属离子的去除率分别达到86.65%、82.63%、73.36%和58.28%。
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