番茄斑萎病毒沉默抑制子NSs与植物互作对西花蓟马选择性的影响

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番茄斑萎病毒(Tomato spotted wilt virus, TSWV)是一种危害严重的植物病毒,主要由西花蓟马(Frankliniella occidentalis)传播。NSs(Non-structure small protein)是番茄斑萎病毒的沉默抑制因子,在病毒感染中不可或缺。截至目前为止,NSs,西花蓟马与寄主植物之间是否存在相互作用仍然未知。本论文构建并鉴定稳定表达外源NSs基因的转基因拟南芥(Arabidopsis thaliana),检测NSs对拟南芥挥发性化合物和西花蓟马选择偏好的影响,并分析调节植物挥发性化合物因素,得到以下研究结果:
  (1)获得稳定表达外源NSs的转基因拟南芥。通过克隆番茄斑萎病毒NSs基因,构建植物表达载体pCambia1301-NSs,使用农杆菌花序浸染法将pCambia1301-NSs转化哥伦比亚野生型拟南芥,获得转基因拟南芥,并通过抗生素初筛和RT-PCR检测鉴定出稳定表达外源NSs基因的转基因拟南芥。
  (2)发现NSs降低拟南芥挥发性化合物的释放并调节西花蓟马的选择偏好。相对于野生型拟南芥植物,西花蓟马更倾向于取食转基因拟南芥,而拟南芥释放三种萜烯类化合物:(E)-β-罗勒烯、β-水芹烯和γ-萜品烯,NSs抑制了这三种萜烯的释放,并且,这三种挥发性化合物对西花蓟马均有排斥作用。表明西花蓟马对转基因植物的偏好是由于NSs抑制拟南芥中萜烯类化合物的释放引起的。
  (3)发现NSs抑制了萜烯类化合物合成途径中5个基因的表达(HMG2, AT3G54250, SQS2, SQE3, XF1),其中HMG2是萜烯生物合成的限速酶;NSs降低了萜烯类化合物以及茉莉酸的合成,但对水杨酸的合成没有影响。表明萜烯类化合物的合成减少与茉莉酸信号水平的降低都是受NSs的影响。
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