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环境雌激素(environmentalestrogen)对人类和野生动物的生存和健康造成严重的影响,引起人们广泛的关注。目前已开始着手建立环境雌激素的筛选方法,并且已有多种筛选方法得到广泛的应用。其中鱼类的卵黄蛋白原(Vitellogenin,VTG)因其特异性高、灵敏度高、取材方便等优点作为环境内分泌干扰物的“生物标志物”已得到较深入的研究,受到高度的重视。
唐鱼(Tanichthysalbonubes)为鲤科(Cyprinidae)鱼丹亚科(Danioninae)唐鱼属(TanichthysLin,1932)的一种小型鱼类,目前有关唐鱼的研究较少,仅有少量针对人工繁殖和毒理学方面的研究,有关唐鱼VTGcDNA的克隆及其作为实验动物检测环境雌激素的研究尚未见报道。
本实验以雌性唐鱼的肝脏为材料利用PCR技术结合5’RACE法和3’RACE法克隆了VTGcDNA全长4171bp,编码1326个氨基酸。并对其序列进行分析,结果表明与同属鲤科的黑头软口鲦(Pimephalespromelas)、鲤鱼(Cyprinuscarpio)和斑马鱼(Daniorerio)的VTG氨基酸同源性分别达到87%、85%和84%,具有很高的相似性。
利用RT-PCR研究唐鱼VTGmRNA在脑、鳃、肝脏、肌肉、卵巢和精巢等的组织分布情况,结果显示:唐鱼VTGmRNA在脑、肝脏、卵巢、鳃、精巢均检测到表达,而在肌肉中没有检测到表达。其中肝脏表达量最高,远高于其他组织;在卵巢表达量次之;在脑、鳃、精巢处于较低的同一水平,有痕量表达,且无显著差异。
建立了唐鱼VTGmRNA半定量RT-PCR的分析方法,并用该方法检测了使用浸浴法17-β雌二醇(E2)对雄性唐鱼肝脏VTGmRNA表达的诱导作用。结果显示,E2为10ng/L时14d可诱导雄性唐鱼VTGmRNA产生,当E2为100ng/L时14d可明显诱导雄性唐鱼VTGmRNA产生。结果为将唐鱼VTGmRNA作为检测环境雌激素效应的敏感分子生物标志物,建立高效、方便、快捷的检测方法提供理论依据。