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DNA损伤修复是细胞对外界损伤的主要防御体系，对维持基因组的完整性至关重要。乳腺癌易感基因1（breast cancer susceptibility gene-1，BRCA1）和乳腺癌易感基因2（breast cancer susceptibility gene-2，BRCA2）在DNA双链损伤的同源重组修复中承担很重要的角色，对DNA双链断裂修复的忠实性起着重要作用。BRCA1、BRCA2基因的突变会造成DNA双链断裂修复功能缺陷，导致体细胞突变的累积，容易诱发乳腺、卵巢及其他肿瘤的发生。鉴于BRCA1、BRCA2基因在DNA损伤修复中的重要作用，本课题拟研究BRCA1、BRCA2基因表达状态对肿瘤细胞及乳腺癌患者的影响。第一部分BRCA1/BRCA2基因敲减对鼠Eμ-Myc p19Arf-/-细胞药物敏感性的影响目的：通过RNA干扰技术构建BRCA1和BRCA2敲减的Eμ-Myc p19Arf-/-鼠淋巴瘤细胞。用30余种药物对其进行处理，筛选出基因敲减后对药物敏感性影响较大的药物。方法：构建表达BRCA1和BRCA2shRNA的逆转录病毒并感染Eμ-Myc p19Arf-/-鼠淋巴瘤细胞。用30余种药物作用于BRCA1/BRCA2基因稳定敲减的Eμ-Mycp19Arf-/-细胞系，比较基因敲减对药物敏感性的影响。结果：成功构建了BRCA1, BRCA2稳定敲减的Eμ-Myc p19Arf-/-细胞系。用DDP,CPT,SAHA,AZD2281,Ara-C,clofarabine,5-FU等药物作用于BRCA1基因敲减的细胞，其死亡率要高于对照组BRCA1正常表达的细胞；用DDP,CPT,17-AAG,AZD2281,TFT等药物作用于BRCA2基因敲减的细胞，其死亡率要高于对照组BRCA2正常表达的细胞。结论：BRCA1基因敲减后细胞对DDP, CPT, SAHA, AZD2281, Ara-C,clofarabine,5-FU等药物有较明显的增敏作用；BRCA2基因敲减后细胞对DDP,CPT,17-AAG, AZD2281, TFT等药物有较明显的增敏作用。为BRCA相关的肿瘤患者的治疗选择提供了新思路。第二部分阿糖胞苷对BRCA1/BRCA2基因敲减的鼠Eμ-Mycp19Arf-/-细胞DNA损伤及周期、凋亡的影响目的：通过western blot检测阿糖胞苷作用后细胞内γH2AX表达水平变化，流式细胞仪检测阿糖胞苷处理后的BRCA1/BRCA2基因敲减的鼠Eμ-Myc p19Arf-/-细胞周期及凋亡的影响。方法：构建表达BRCA1和BRCA2shRNA的逆转录病毒并感染Eμ-Myc p19Arf-/-鼠淋巴瘤细胞。用合适浓度的阿糖胞苷作用于该细胞，利用western blot检测阿糖胞苷作用后细胞内γH2AX表达水平变化，并用流式细胞仪检测该细胞周期及凋亡的变化。结果：阿糖胞苷处理后，细胞内γH2AX表达明显增高，并且BRCA1基因敲减的Eμ-Myc p19Arf-/-细胞中γH2AX增高较BRCA1正常表达的细胞明显，而BRCA2敲减的细胞中γH2AX的表达与正常细胞无明显差异；阿糖胞苷处理以后，BRCA1及BRCA2正常表达及基因敲减后的Eμ-Myc p19Arf-/-细胞在G1期的细胞均明显增多，提示药物作用后细胞周期被阻滞在G1期。BRCA1及BRCA2正常表达及敲减的Eμ-Myc p19Arf-/-细胞早期及晚期凋亡率均明显升高，并且BRCA1基因敲减的细胞凋亡率要高于BRCA1正常表达的细胞。而BRCA2基因敲减的细胞虽然凋亡率较未用阿糖胞苷处理的细胞升高，但与BRCA2正常表达的细胞相比无明显区别。结论：阿糖胞苷处理以后会导致细胞内累积DSB，并使BRCA1及BRCA2敲减的Eμ-Myc p19Arf-/-细胞被阻滞在G1期，后引起细胞凋亡。第三部分BRCA1、BRCA2在乳腺癌组织中的表达及其临床意义目的：通过对乳腺癌和癌旁组织中BRCA1及BRCA2蛋白的表达情况及其与乳腺癌临床病理参数相关性的探讨，分析其作为乳腺癌预后或预测因子的可行性，为临床治疗的选择提供一定的理论基础。方法：收集434例乳腺癌和135例癌旁组织的手术标本，制作乳腺癌组织芯片，利用免疫组化技术研究BRCA1、BRCA2蛋白在乳腺癌及癌旁组织中的表达情况及其临床意义。结果：BRCA1和BRCA2蛋白在乳腺癌旁组织中的表达明显高于癌组织。BRCA1阳性表达水平在淋巴结无转移组明显高于淋巴结转移组；在PR阳性组明显高于PR阴性组；在非三阴型乳腺癌组明显高于三阴型乳腺癌组，其差异具有统计学意义。BRCA2阳性表达水平在PR阴性组明显高于PR阳性组，在三阴型乳腺癌组明显高于非三阴型乳腺癌组，其差异具有统计学意义。多因素分析显示PR与BRCA1显著相关。生存分析结果提示患者生存期长短与BRCA1和BRCA2表达水平无显著相关性。COX比例风险回归模型进行预后独立因素分析，发现分期、PR表达水平是独立预后因素。结论：BRCA1及BRCA2蛋白在乳腺癌组织的表达水平较癌旁组织明显降低。BRCA1蛋白的表达水平和淋巴结状态、PR状态及是否为三阴型乳腺癌存在相关性；BRCA2蛋白的表达水平和PR状态及是否为三阴型乳腺癌存在相关性。分期和PR状态为乳腺癌独立的预后因素，对乳腺癌预后的判断具有一定的指导意义。