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本文以桂木1号木豆(Cajanus cajan L.)为材料,对其离体快繁、适宜于遗传工程的再生体系、以及离体材料的遗传稳定性等方面进行了探讨,以期为资源的离体快繁、离体保存和遗传转化等提供了技术平台。取得以下结果: 1、离体再生体系的建立与优化 无菌系的建立,用75%酒精浸泡30s后,分别用0.1%升汞溶液和10%NaClO3溶液采用不同时间进行灭菌。随后接种在MS+BA(0.5mg/L)+IBA(0.1mg/L)+蔗糖(3.0%)+琼脂(0.7%)培养基上,得出最佳处理方式为10%NaClO3溶液灭菌15min其污染率8%,萌发率84.7%。外植体类型、年龄、培养基中生长调节物质(PGR)种类及含量等因子对木豆离体再生有很大影响。选用萌发后种子的子叶节接种于EC6+BA(4.0mg/L)+IBA(0.1mg/L)+蔗糖(3.0%)+琼脂(0.7%)的培养基中,获得了较高的不定芽再生频率为91.7%。不定芽增殖培养最佳培养基为EC6+BA(4.5mg/L)+IBA(0.1mg/L)+KT(0.4mg/L)+AdS(90mg/L)+蔗糖(3.0%)+琼脂(0.7%),增殖系数达到(4.6)。生根培养以1/2MS+IBA(0.2mg/L)+蔗糖(2.0%)+琼脂(0.7%)培养基上效果最佳。炼苗约15d后移栽,移栽成活率82.5%。 2、愈伤组织培养 外植体类型、基本培养基、生长素种类及浓度对木豆愈伤组织的诱导有一定影响。以子叶节接种在B5+BA(1.0mg/L)+KT(1.0mg/L)+蔗糖(3.0%)+琼脂(0.7%)的培养基中诱导愈伤组织效果较好,出愈率为52.7%。 3、离体材料的常温保存 把木豆试管苗接种在1/4MS+蔗糖(1.5%)+琼脂粉(0.7%)培养基中添加3.0mg/L脱落酸(ABA)进行常温保存效果最好,苗生长高度为3.3cm,芽苗生长缓慢,较健壮,叶绿,约50d继代一次。 4、离体材料遗传变异的分子检测 采用60个引物对木豆田间材料、离体材料进行ISSR检测,结果表明,试管苗在继代5代内及第5代内20个株系的DNA进行检测,均未检测到变异。因此在所有引物检测范围内,木豆试管苗在5代内DNA分子上没有发生变异。