消癌平注射液及其与奥沙利铂和恩度联合抗肝癌血管生成的实验研究

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[目的]通过体内、外实验研究消癌平单药及其联合奥沙利铂和重组人血管内皮抑制素(恩度)对人肝癌细胞及其血管生成的作用及机制,为中药联合化疗和抗血管生成药物治疗肝癌提供理论依据。[方法](1)采用MTT法观察不同浓度的消癌平、奥沙利铂、恩度单药和联合用药对人肝癌细胞株SMMC-7721和人脐静脉内皮细胞(HUVEC)增殖的影响;(2)观察不同浓度消癌平、奥沙利铂、恩度单药和联合对鸡胚尿囊膜新生血管生长的影响;(3)采用免疫组化法观察上述药物对人肝癌细胞株SMMC-7721细胞和人脐静脉内皮细胞(HUVEC)中VEGF、MMP-2和MMP-9等血管生成相关因子表达的影响。[结果](1)消癌平、奥沙利铂单药对SMMC-7721细胞增殖具有抑制作用,并具有时间和浓度依赖性;72h时消癌平联合奥沙利铂和恩度的两药组及三药联用的三药组对SMMC-7721的增殖抑制作用与各单药组比较均具有显著的差异(P<0.01);而恩度对SMMC-7721的增殖抑制作用与对照组比较差异不明显(P>0.05)。20μl/ml消癌平与1μg/ml奥沙利铂联合时呈相加作用;20μl/ml消癌平与6μg/ml恩度联合则具有明显的协同作用。(2)消癌平单药能抑制HUVEC细胞的增殖,具有时间和剂量依赖性(P<0.01);奥沙利铂对HUVEC增殖有抑制作用(P<0.01);72h时,恩度在50~200ng/ml的浓度范围内,对HUVEC增殖表现出明显的抑制作用(P<0.01);72h时三药联合作用优于其它各实验组(P<0.01)。(3)30μl/ml和60μl/ml消癌平、1μg/ml和2μg/ml奥沙利铂、6μg/ml恩度单药及两药联合均有抑制鸡胚尿囊膜(CAM)新生血管形成的作用,与对照组比较差异明显(χ2=25.498,P<0.01);各实验组之间则差异无统计学意义。(4)消癌平、奥沙利铂、恩度单药和联合对SMMC-7721和HUVEC细胞株中VEGF、MMP-2、MMP-9蛋白的表达均有抑制作用。三药组对SMMC-7721细胞MMP-2和VEGF蛋白的表达抑制作用优于其它各组,差异具有统计学意义(P<0.05),对HUVEC细胞MMP-2蛋白的表达抑制作用优于其它各组,差异具有统计学意义(P<0.05)。[结论]消癌平、奥沙利铂、恩度单药在体外对人肝癌细胞株SMMC-7721和人脐静脉内皮细胞(HUVEC)增殖和体内对鸡胚尿囊膜血管新生均有抑制作用;消癌平对SMMC-7721增殖抑制具有时间和浓度依赖性,而联合用药具有明显的协同增效作用。其抗肝癌血管生成的机制可能与抑制血管内皮细胞管腔形成和下调细胞内VEGF、MMP-2和MMP-9等肿瘤血管生成密切相关的因子的表达有关。
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